小片断正好成为DNA聚合酶的引物.PPTVIP

　妙用RNaseH 　　　这种酶能识别mRNA-cDNA杂交分子中的mRNA，并将其降解成许多小片断。 　　　小片断正好成为DNA聚合酶的引物，用来合成冈崎片断。 　　DNA PolI除去引物并修补后再使用DNA连接酶连成一整条DNA链。 ③ cDNA第二链合成（置换合成法） mRNA cDNA第一链 3’ 5’ 引物 mRNA cDNA第一链 3’ 5’ mRNA mRNA DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 cDNA第二链 cDNA第一链 3’ 5’ RNaseH DNA ligase 去引物 置换合成法 在双链cDNA末端接上人工接头（含限制性内切酶黏性末端），即可与载体连接，转入受体菌。 或借助末端转移酶给载体和双链cDNA的3’端分别加上几个C或G，成为粘性末端。 接上人工接头 粘性末端 CCC CCC 末端转移酶 （4）cDNA与载体连接 （5）重组载体转化受体菌 分子探针杂交法：用目的基因探针与文库中的重组载体进行Southern blot杂交。 文库 载体 探针 电泳后杂交放射自显影 测序分析 文库的筛选（screening） Genomic library与cDNA library区别 ① 基因组文库克隆的是任何片段，包括未知功能的DNA序列、调控基因，cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因。 ② 基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空