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CRISPR/Cas9 基因组编辑的研究进展学科教学（生物） 王菲 1611290055 ?『基因编辑技术』?『CRISPR/Cas 的研究进程』要点?『CRISPR/Cas 的结构、分类及作用机制』?『CRISPR/Cas 在基因治疗中的应用』?『存在问题和展望』第一部分『基因编辑技术』基因编辑技术 2016年5月2日河北科技大学副教授韩春雨在《自然-生物技术》发表论文《NgAgo-DNA单链引导的基因编辑工具》。1基因编辑技术 基因编辑技术是通过人为操作引起特定基因的插入、缺失或替换等，对基因组进行精确修饰和定向编辑的一种技术。?① Cre-LoxP重组酶系统：Cre 重组酶是一种具有催化活性的单体蛋白,它与限制酶功能相似，能识别特异的 DNA 序列，即 loxP 位点，使 loxP位点间的基因序列被删除或重组。1基因编辑技术大片段双链RNA二聚体酶Dicer?② RNA干扰：小分子干扰RNARNA+沉默诱导复合体RISC配对影响翻译1基因编辑技术③ 人工内切核酸酶技术基于特制的 DNA-结合特异性的蛋白质系统，通过束缚核酸内切酶的催化区域，调节 DNA 结合蛋白，引起特定位点的靶向双链 DNA 断链。 ?锌指核酸酶 （ZFNs ） ?转录激活因子样效应物核酸酶（TALENs） ZFNsTALENs将识别特异DNA序列的TALEN与内切核酸酶FokI偶联,可构建成剪切特异DNA序列的内切酶TALENs1基因编辑技术③ 人工内切核酸酶技术 ? 规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR/Cas）：通过一小段与靶向 DNA 碱基互补配对的RNAs 及其引导 Cas 蛋白，引起 DNA 位点特异性靶向双链 DNA 断链，产生靶基因修饰。 1第二部分『研究进程』CRISPR/Cas 的研究进程Mojica发现这种串联重复序列在原核细胞中广泛存在。发现 CRISPR中的间隔序列来源于外源基因，并推测其可能与细菌和古生菌的获得性免疫相关。1987年2002年2005年2000年日本Ishino在大肠杆菌碱性磷酸酶基因附近第一次发现CRISPR串联重复序列。科学家正式命名CRISPR和Cas基因。2CRISPR/Cas 的研究进程Brouns发现间隔序列可以转录形成 crRNAs ，具有指导 Cas 蛋白靶向干扰的作用。Marraffini 发现 CRISPR/Cas系统系统的作用靶点是DNA。Deltcheva 发现 II 型 CRISPR-Cas系统中另一个重要组分tracrRNA，它与 crRNA 结合形成二元复合体，指导 Cas9 蛋白的定点剪切。Sapranauskas证实 II 型CRISPR-Cas系统可以异源性地表达在其它物种。2007年2009年2011年2008年Barrangou首次实验证实CRISPR系统的获得性免疫作用。Hale 发 现 III 型 B 亚 型 的CRISPR-Cas系统还可以靶向性切割RNA。2CRISPR/Cas 的研究进程CRISPR-Cas系统首次被成功应用于真核细胞的基因编辑。全新基因编辑系统CRISPR/Cpf1。2012年2014年2015年2013年珍妮弗·杜德娜和艾曼纽·夏邦杰首次体外证实 Cas9 蛋白可以与靶DNA 特定位点结合并行使剪切作用。获2015年生命科学突破奖。解析Cas9蛋白的晶体结构。2CRISPR/Cas 的研究进程2016年12月CRISPR/Cas重大进展梳理1.Nature：发现两种新的CRISPR系统：CasX和CasY系统2.Cell：首次发现CRISPR/Cas9基因编辑的“关闭开关”3.Cell：发现两种新的抗CRISPR蛋白：AcrIIA2和AcrIIA4，能阻断来自酿脓链球菌的Cas9酶活性4.Nat Genet：利用CRISPR鉴定出潜在的HIV治疗靶标5.Science：利用CRISPRi鉴定出细胞生长所需的499个lncRNA6.Nat Methods：开发出自我编辑的CRISPR条形码7.Cell：将CRISPR和单细胞RNA测序结合在一起分析基因功能 ……2第三部分『 CRISPR/Cas结构 、分类及作用机制 』CRISPR/Cas 的结构 CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats），被称为规律成簇间隔短回文重复序列，实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统，也是一种对付攻击者的基因武器。3CRISPR/Cas 的结构间隔区由俘获的外源DNA组成，类似免疫记忆。前导序列 Cas 基因主要编码核酸酶和 DNA 解旋酶等切割修饰核酸的相关的 Cas 蛋白。保守的重复序列区长度为21～48bp含有回文序列，可