分子生物学 转录及其调控.pptxVIP

第三章 转录及其调控;遗传信息由DNA转换到RNA的过程。 蛋白质生物合成的第一步，合成mRNA以及非编码RNA（tRNA、rRNA等）;多核苷酸链的合成都是以5’→3’的方向. 转录特点： （1）对于一个基因组来说，转录只发生在一部分基 因，而且每个基因的转录都受到相对独立的控制 （2）转录是不对称的 (3）转录时不需要引物，而且RNA链的合成是连续的。;一、所需因素;2.RNA聚合酶（RNA polymerase） RNA聚合酶有以下特点： （1）无需引物的存在能独自起始新RNA链 的合成 （2）没有校对能力； （3）催化的底物是核糖核苷三磷酸。 ; 大肠杆菌只有一种RNA聚合酶，负责所有rRNA、mRNA和tRNA的合成。该酶具有全能性，基本上不需要其他蛋白因子的参与，即可独立的进行。 功能： （1）识别DNA双链上的启动子 （2）通过阅读启动子序列，确定转录方向和模板链 （3）解开DNA部分双螺旋，产生约17 bp的单链DNA模板 （4）选择正确的核糖核苷三磷酸（rNTP）底物并催化形成磷 酸二酯键，使合成的RNA链不断延伸。 （5）最后当它达到终止子时，识别转录终止信号，停止转录。;结构： 5种亚基组成：两个α亚基、1个β亚基、1个β′ 亚基 和1个δ亚基。 转录的起始阶段： δ亚基和核心酶（ α2ββ′）组装成全酶共同起作用。δ亚基无催化活性，但它能识别启动子并将封闭的启动子复合物转换成开放状态。 一旦转录起始，δ亚基就从全酶上脱离下来。核心酶与模板DNA结合的亲和力弱，特异性差，这有利于它在模板链上移动，促进转录延伸。 ;σ因子负责识别启动子的保守序列，不同的σ因子识别不同的启动子。 许多细菌能产生多种可取代的σ因子，以识别不同的启动子。;大肠杆菌只有一种RNA聚合酶，负责所有rRNA、mRNA和tRNA的合成。并且该酶具有全能性，基本上不需要其他蛋白因子的参与，即可独立的进行转录的起始、延伸和终止。;一些抗生素，如利链菌素，可以抑制原核生物的RNA聚合酶，使得原核生物的基因无法转录成mRNA，从而达到杀死细菌等原核生物的效果。 ;1.转录起始 1）全酶与模板的DNA接触，生成非专一的，不稳定的复合物在模板上移动。 2.起始识别：全酶与-35序列结合，产生封闭的酶-启动子二元复合物。 3.全酶紧密地结合在-10序列处，DNA模板局部变性，形成开放的启动子二元复合物。（RNA聚合酶与启动子结合后造成约10bp的DNA解链） 4.合成短多聚核苷酸（10nt),三元复合物形成。（酶-启动子-NTP） 5. σ因子从全酶中解离下来，聚合酶转变为延长构型。酶分子与启动子特异性结合性的结合力下降，延伸阶段开始。 ;转录延长;三、转录的终止;不依赖ρ因子终止作用： 在转录终止点之前有一段回文序列，回文序列的两个重复部分之间由几个碱基对的不重复阶段隔开;依赖于ρ因子终止作用 ρ因子是55KDa蛋白，其活性形式为六聚体 1）促进转录终止活性 2）NTPase活性，需要RNA链。 ;转录单元是一段被转录成单链RNA的DNA序列，它起始于启动子，结束于终止子。 一个转录单元可能包含不止一个基因。 ;一、所需因素 转录起始需要启动子，RNA聚合酶和转录因子参与。 1.转录起始前的上游区具有启动子核心序列。不同物种、不同细胞或不同的基因转录起始点上游有不同的DNA序列，统称为順式作用元件（cis-acting element). 順式作用元件包括启动子、启动子上游元件等近端调控元件和增强子等远隔序列。;起始点上游多数有共同的TATA序列，称为TATA盒。（启动子核心序列） 启动子上游元件是位于TATA盒上游的DNA序列，多在转录起始点约-40~-100nt的位置，常见的是GC盒和CAAT盒。 增强子-能够结合特异基因调节蛋白，促进邻近或远隔特定基因表达的DNA序列。;2. 真核生物有三种DNA依赖RNA聚合酶;真核生物转录起始十分复杂，往往需要多种蛋白因子的协助。 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，已发现数百种。统称为反式作用因子（trans-acting factors) 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的称为 转录因子（transcriptional factors,TF).;真核生物RNA聚合酶不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物（pre-initiation complex,PIC).;第一类为普遍转录因子它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合物，转录才能在正确的位置开始。TFⅡD,TFⅡA，TFⅡF，TFⅡE