疟原虫血片制作及计数.pptx

疟原虫血片制作质量控制及疟原虫计数;赵晓涛疟疾防制科科长云南省消除疟疾暨全球基金疟疾项目副主管;血片制作; 血膜的制作（取血时间）; 血膜的制作（取血操作）; 取血量及涂片法（涂片操作）;;（涂片操作）;;;血膜的制作（涂片操作）;血膜的制作; 制作血膜的注意事项;制作血膜的注意事项;制作血膜的注意事项;镜检疟原虫血片的染色一、染液的种类及染色原理;镜检疟原虫血片的染色（一）染液的种类;镜检疟原虫血片的染色（二）染色的原理;镜检疟原虫血片的染色（二）染色的原理;镜检疟原虫血片的染色（二）染色的原理;镜检疟原虫血片的染色（二）染色的原理; 这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点，也是我们推荐的染色方法。 将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨??然后边加边磨，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径3 ~5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于室温内，每天用力摇动5分钟，3天后即可使用。;吉氏染液染色方法： 先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟，然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。 ;单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2％吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本上染色30分钟左右，或用中性蒸馏水1毫升，加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标本上，染色10~15分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。;2、瑞式染液的配制：; 瑞氏染液的染色方法：;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;影响染色效果的因素;（三） 厚薄血膜的优缺点及其适用范围 薄血膜 用血量约为2μl，涂制成2cm宽×4cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，便于疟原虫虫种的鉴定。唯由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查。特别在医院的化验室，由于要求在短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。; 厚血膜 用血量约为4μl～5μl。涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大滋养体、裂殖体的形态。 由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的15～25倍。所以，我们推荐疟疾诊断应以检查厚血膜为主。在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。;疟原虫密度计数方法 一、粗略的（半定量）计数： 用厚血膜每个视野中所观察到的疟原虫的平均数可粗略地估计为疟原虫密度。 这种方法简便，缺点是计数的疟原虫数受制作的血膜厚度所影响，在流行病学上不宜用这种数据作疟原虫感染密度的定量分析。;国内常用此方法将密度分为六级： 1 . 全厚血膜查见疟原虫数在10个以内，记录实际数字； 2 . 全厚血膜查见疟原虫数在10个以上，但平均每个视野不到1个虫，记录“少”； 3 . 100个视野中查见的疟原虫数平均每个视野1~5个，记录“+”； 4 . 100个视野中查见的疟原虫数平均每个视野6~10个，记录“++”； 5. 100个视野中查见的疟原虫数平均每个视野11~100个，记录“+++ ”； 6. 100个视野中查见的疟原虫数平均每个视野100个以上，记录“++++ ”。; 2． 厚血膜的疟原虫计数 根据预先测定的白细胞数目计算出每微升血液中疟原虫的数目。在制作厚血膜的同时，使用Coulter计数器或血球计确定每微升血液中的白细胞数。然后镜检厚血膜，计数同一视野中的疟原虫数和白细胞数，直到所计数的白细胞数达到确定的数值为止(如果疟原虫密度较高，计数100～200个白细胞即可，但在疟原虫密度很低时，计数