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环境工程微生物实践（实验）报告 实践（实验）项目名称： 放线菌形态观察的实验 学号 姓名 班级 15-环工 实践（实验） 化生实验楼 实践（实验） 指导老师 马老师 地点 317 时间 一、 实践目的（实验原理与目的 ） 原理 ： 放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。 菌丝体分为两 部分，即潜入培养基中的营养菌丝和生长在培养基表面的气生菌丝。 有些气生菌 丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或 杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。 目的 ： 放线菌自然生长状态的观察 二、 实践内容（实验内容与步骤） 1. 实验准备 （一）培养基 制作高氏一号培养基：准备可溶性淀粉 10g、硫酸铁 0.25g 、硝酸钾 0.5g 、琼脂 10g、氯化钠 0.25g、磷酸钾 0.25g、硫酸镁 0.25g、蒸馏水 500ml （二）．溶液或试剂 10%酚酞液，盛 9ml 无菌水的试管，盛 90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶， 4%水琼脂。 （三）. 仪器 无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿、土样。 （四）. 流程 倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→观察 2. 操作步骤： （一）．来源 土壤中放线菌丰富，品种齐全，可以筛选出新的放线菌。我们选择的是从实验 室楼下的土壤中取样 10g。 （二）．培养基的制备 1、称量和溶化 按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状， 再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再 称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分 FeSO4．7 H2 O 可先配成高浓 度的贮备 液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到 所需的总体积。 配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在 加热融化，最后补充所损失的水分。 2、调 pH 用试纸测培养基的原始 PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入 1mol/L Na0H, 边滴边搅拌， 并随时用 pH试纸测其 pH,直至 pH达 7.6 。反之，用 1mol/LHCI 进行调节。 3、分装和加塞 将配制的培养基装入磨口三角瓶内，在瓶口上塞上橡胶塞。 4、包扎 加塞后，外包一层报纸， 其外再用一根麻绳扎好。 用记号笔注明培养基名称、 组别、配制日期。 5、灭菌 将上述培养基以 120℃, 20min, 0.103MPa 高压蒸汽灭菌。 6、无菌检查 将灭菌培养基放入 25℃的培养箱中培养 1h，以检查灭菌是否彻底。 (三) ．分离 1、倒平板 将高氏 I 号培养基加热熔化待冷却至 55-60° c 时倒入培养皿。倒平板的方 法：右手持培养基的试管或三角瓶置于火焰旁边。用左手将试管塞或瓶塞拔 出，试管口或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速倒入培养基 15ml-20ml，加盖后平置于桌面上，待凝固后即为 平板。 2、制备土壤稀释液 称取土样 10g，去花坛等地方的土样，选好采样地点，除去表层 5cm。用无 菌器具规范采样几十克，装入无菌塑料袋扎好。采样后应尽快分离。振摇匀 20min，使土壤与水充分混匀，将细胞分散。放入盛有 90ml 无菌水的三角瓶 中，充分混合。用一支 1ml 无菌吸管从三角瓶中吸取 1ml 土壤悬液盛入放有 9ml 无菌水的试管中充分混匀，然后从此试管中吸取 1ml 加入另一盛有 9ml 1 2 3 4 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成 10ˉ 、10ˉ、10ˉ 、10ˉ 、 5 6 10ˉ、10ˉ 共六种不同稀释度的土壤溶液。 3、涂布 4 5 将上述每种的三个平板底面分别用记号笔写上 10ˉ 、10ˉ 、10ˉ 6 三种稀释 度，然后用无菌吸管分别由 10ˉ 4、10ˉ5、10ˉ6 三管土壤稀释液中各吸取 0.1ml ，小心的滴在对应平板培养基表面中央位置。用无菌涂布器涂布。右 手拿无菌涂布器放在平板培养基表面上， 将细菌悬液先沿同心圆方向轻轻地 向外扩展，使之分布均匀，室温下静置 5-10min，使菌液浸入培养基。 4、培养 将高氏 I 号培养基平板倒置与 28℃培养箱中培养 24 h 。 5、挑菌落 将培养出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基斜面上， 置 28℃温室培 养。若发现有杂菌，须再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 三、 实践工艺流程（实验结果与数据处理） 四、 结果分析（分析与讨论 ） 菌落特征 卡那霉素链霉菌 卡特利链霉菌 卡那霉素链霉菌 培养基 高氏一号培养基 菌落形态 同心圆 放射状 表面干燥呈粉状 颜色 深黄色 淡白色 浅黄色 气味 土腥味 五、 总结 。 六、 注意事项 教师评语： 签名： 日期： 年 月 日