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实体瘤组织单细胞悬液制备及培养方案 单细胞悬液制备 仪器、材料及试剂 仪器： (1) CO2培养箱（调至37℃），离心机，水浴锅（37℃），血球计数板； (2) 无菌器械：细胞培养瓶，50 ml离心管，平皿，吸管，移液管，纱布，200目/ 300目尼龙滤网，手术器械。 材料：肿瘤造模成功的大鼠 试剂：RPMI1640 培养基（含10%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液/PBS缓冲液，碘酒 附：Hank’s液配方： KH2PO4 ：0.06g；NaCl：8.0g；NaHCO3：0.35g；KCl：0.4g； Glucose：1.0g； Na2HPO4·H2O：0.06g； 加H2O定容至 1000 ml 注：Hank’s液可以高压灭菌，4℃下保存。 操作步骤 机械-胰酶消化法 取材：制备实体瘤单细胞悬液，肿瘤取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，挑选活力较好的部位。将大鼠麻醉，置75%酒精泡3-5 min（时间不能过长，以免酒精从口和肛门浸入体内），固定后再用碘酒消毒腹部，带入超净台内解剖取肿瘤组织，置于平皿中。 用Hank’s 液/PBS缓冲液洗涤三次，并剔除周围脂肪、结缔组织、血液等。 用无菌眼科手术剪将肿瘤剪成小块（1-2 mm），再用Hank’s 液/PBS缓冲液洗涤三次，转移至50 ml 离心管中。 视组织块量加入