PFGE--标--准--方--法1.docxVIP

PFGE 标 准 方 法 第一天 胶块的制备 在Falcon 2054管上标记样品名称和空白对照，分别加入约2ml细胞悬 浊液（CSB）； 在1.5ml eppendorf管上标记好对应样品的名称； 在模具上标记好对应样品的名称； 用CSB湿润接种环，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB中， 用bioMerieux Vitek colorimeter测其OD值，并调整至3.6~4.5。如果OD值大于4.5，加入CSB稀释；如果OD值小于3.6，增加菌量提高其浓度。OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，是检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，1OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 取400μl细菌悬浊液于相应的1.5ml eppendorf管中，置于37℃水浴中孵 育5分钟。将剩余的细菌悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。 从水浴箱中取出eppendorf管，每管加入20μl蛋白酶K(Merk公司)（储存液浓度为20mg/ml）混匀，使其终浓度为0.5mg/ml。制备好1%Seakem Gold(Bio-RAD,伯乐公司)：1%SDS（十二烷基硫酸钠），放于56℃水浴箱中。