高通量筛选技术应用.pptx

高通量筛选技术的应用;高通量筛选（ HTS）又称大规模集群式筛选，是由高容量 化合物库、自动化操作、高灵敏度检测、高特异筛选模型、 高效率数据处理 5 个子系统有机组合而成，是一种新型、 高自动化、高灵敏度、高通量的筛选技术。;;高通量筛选( high-throughout screening)是近年来迅速发展起来的药物筛选技术 ,它通过运用基因科学 、蛋白质科学 、分子药理学 、细胞药理学 、微电子技术等多学科理论和技术 , 以及与疾病相关的酶和受体为作用靶点 ,对天然或合成化合物进行活性测试 , 并在此基础上进行筛选 。 高通量筛选具有快速 、高效 、经济 、高特异性等优点 ,其中所用的样品量甚少的特点 尤其适用于天然化合物的活性筛选;药物高通量筛选技术分类（筛选平台）：分子平台、细胞平台、酵母平台、动物平台;由于天然药物中成分复杂性及多种成分间可能存在的协同作用 , 因此有效成分的分析 、鉴定和筛选是天然药物开发中的一个难题。同时,许多天然药物临床资料相对不足, 仍需要进行必要的再认识和验证 。面对海量的天然药物 , 高通量筛选技术特有微量 、快速 、灵敏和准确等特点。;特点：理性设计和定向进化;;分光光度测量法和荧光检测法：;酸检测法：是一种经常应用于脂肪酶或者酯酶的高通量筛选方法 , 主要包括 pH 指示剂法 、乙酸法以及最近出现的荧光钠盐法 。 ;酵母表面展示技术 ( Surface Display)是一类筛选蛋白质突 变体库的高通量筛选方法, 在抗体蛋白的研究中应用尤其广 泛, 具有高效、灵敏等特点。;RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具， 利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的 目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。siRNA在RNA沉 寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进 行降解的指导要素。siRNA是RNAi途径中的中间产物， 是RNAi发挥效应所必需的因子。;;将文库siRNA逐一转染到孔板的每个孔， 72 h后， 基因被沉默降低到一定程度。加入包被I-SceI的腺病毒， 侵染细胞过表达I-SceI。 48 h后， 细胞内sensor上靶点序列被I-SceI切割， 诱导同源重组。 将细胞固定染色， 通过高通量筛选仪器获取信号， 进行分析统计。;包括4个步骤: 针对基因编码区靶点的DNA序列在芯片上合 成后，通过公用的接头， PCR克隆进入慢病毒载体，并包 裹病毒；将慢病毒文库侵染细胞，启动shRNA序列表达的 序列被整合到细胞基因组上，而沉默细胞内该基因的表达； 在特定时间、药物诱导下，存活下来的细胞得以扩增；提 取细胞的基因组，深度测序，找到相应shRNA拷贝数。;高通量siRNA筛选的新发展方向：;高通量筛选技术具有以下几方面的发展趋势： ①采用基于细胞的分析筛选方法，可直接在活细胞内检测化合物，提高筛选的准确性； ②采用精确的检测技术，使之能够在相同的分析过程中兼顾效率和特异性； ③基于功能基因组学的药物高通量筛选逐渐受到重视并应用； ④开始分析和处理工业中的实际问题。该系统在后基因组时代研究和药物发现之间架起桥梁，将很快渗入到未来市场中，打破从基因到药物研发链条中的瓶颈;谢谢