中华人民共和国国家标准-检验检疫标准管理信息系统.doc

PAGE 6 PAGE 5 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口贝类中神经性贝类毒素检验方法－酶联免疫吸附试验法 编制说明 任务来源和工作情况 根据国家质检总局的标准制订计划安排（计划编号为：2009B404x），由辽宁出入境检验检疫局负责中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《进出口贝类中神经性贝类毒素检验方法－酶联免疫法》（即本标准）的起草工作。本标准是在上述项目研发的ELISA检测试剂盒的基础上制定的，同时在标准的制定中也参考了比利时ABRAXIS公司生产的神经性贝类毒素检测试剂盒。 商业化试剂盒，若测定低限（或满足国内外限量要求）、回收率达到本标准的要求，则也适用于本标准。 本标准编制工作组引用和参考了SN 1573-2005出口贝类神经性贝类毒素检验方法，系统研究了国内外相关文献，工作组在标准制订过程中，仅就酶联免疫吸附试验的测定、测定低限和回收率等方面作了实验，并与小白鼠生物试验法进行了比较，建立了可行、稳定的检验方法。 按GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》的要求完成了编制工作。 编制本标准的目的和意义 贝类毒素属海洋天然有机物，它的形成与海洋中有毒藻类赤潮密切相关。据文献报道[1]，能形成赤潮的微藻约有184~267种，其中有毒微藻约为60~78种。赤潮对我国沿海地区最大的危害是导致养殖的鱼、虾、贝类死亡。众所周知，我国是世界上海洋养殖业最为发达的国家之一，水产养殖业已经成为很多沿海地区的重要产业之一。大面积、高频度的赤潮发生，使得养殖业损失惨重，已成为海产养殖业可持续发展的关键制约因素之一。除了养殖业损失，赤潮对我国沿海造成的另一个主要灾害就是人类中毒事件。某些赤潮生物能产生毒素，这些毒素通过食物链（有毒藻类--浮游动物--鱼、虾、贝类--人类）的传递，使得毒素进入人体而产生毒害作用。目前全球已经发现5种主要的与赤潮有关的毒素，即麻痹性贝毒（PSP）、腹泻性贝毒（DSP）、神经性贝毒（NSP）、记忆缺失性贝毒（ASP）和西加鱼毒（CFP）。在我国，已经发现并造成毒害事件的主要有麻痹性贝毒（PSP）、腹泻性贝毒（DSP）和西加鱼毒（CFP）。这些毒素造成了多人中毒，甚至多次导致了死亡事件的发生[2] 。 神经性贝毒（neurotoxic shellfish poison，NSP）是海洋贝类毒素中引起赤潮最主要的一种，中毒严重者可危及生命。尽管贝毒种类中还有神经性贝类毒素（NSP）、腹泻性贝毒（DSP）及失忆性贝毒（ASP）等几种，但神经性贝毒中毒症状主要是中枢神经发生障碍。其安全限值为80μg/100g，因而倍受重视。神经性贝类毒素是化学结构以短裸甲藻毒素（brevetoxin）为代表。神经性贝毒引起中毒的途径有两条，一是经由贝类作为传递媒介，人食用后表现出神经中毒的症状；另外在有短裸甲藻赤潮发生时，波浪运动形成的有毒气溶胶可能进入人的呼吸系统引起类似气喘的症状。除对人类的影响之外，短裸甲藻毒素还导致了大量的鱼类死亡事件。与麻痹性贝毒阻断Na离子内流相反，神经性贝毒的活性成分短裸甲藻毒素可以诱导钠离子内流，从而导致肌肉和神经细胞的去极化。但其效应能够被作用于钠离子通道位点的毒素，如STX和TTX完全消除。[3] 目前常见的NSP检测技术分别为：小白鼠生物试验法、HPLC法、酶联免疫法[5]。小白鼠生物试验法是目前唯一得到国际公认的AOAC标准生物技术检测NSP的方法，被许多国家接受和采用，我国目前也采用该方法对贝毒实施检测。但该方法存在着很多不足和缺陷，如：仅能检出毒性的大小，无法确定毒素的组成和含量；所测得的毒性和小鼠的品系有关，可比性较差, 必须进行标准毒素的校准才有可能相比；毒性测定结果的重复性差；毒性测试所需时间长；需要受过专门训练的操作人员；小鼠维持费用较高等。因此人们极希望能有另外一些操作简便，可比性强，费用较低的生物检测手段来取代小白鼠生物试验法。 化学仪器分析技术检测贝毒也有许多不足之处，如化学检测的仪器采用的柱后衍生荧光检测技术，必须严格控制条件才能获得理想的结果[5]。近些年来，贝毒的分析领域不断涌现出一些新的技术，例如应用液相色谱-质谱联用技术，毛细管电泳技术等。然而相对于传统的液相色谱技术，这些方法还有待于进一步完善。此外，采用仪器分析必须配备昂贵的仪器设备，样品前处理复杂，工作量大，很难在基层单位和大规模普查中推广应用。 酶联免疫（ELISA）法随着国内外近20年来技术上的不断创新和发展，已经在病毒、细菌、农兽药残留、抗生素、有害化合物、毒素等方面得到了广泛应用。ELISA方法检测NSP测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对NSP抗体的捕捉抗体，加入标准或样品溶液及NSP酶标记物，游离NSP与NSP标记物竞争NSP抗体，同时NSP