血清型1，2，6，7胸膜肺炎放线杆菌多重PCR检测方法的建立与应用.pdfVIP

序为94℃预变性4min，94℃变性45S，54-56。C复性45S，72℃延伸Imin，共35个 循环，最后72℃延伸10min，4。C保存。对多重PCR特异性进行检测，结果从APP血清 ． 型l-4，6-10标准株中扩增出与引物相应的特异性片段：对常见的与猪呼吸道疾病有 。“ 关的病原体猪副嗜血杆菌、猪肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、肠炎沙门氏菌、猪链球 f ≯ 菌、大肠杆菌和猪丹毒杆菌进行扩增，均不能扩增出任何片段。把DNA模板倍比稀释 i 进行敏感性试验，能够检测到lOpg的DNA量。 4 应用 用APP血清型l，2，6，7标准株培养物分别攻毒健康小猪，然后分别采 集鼻腔病料和肺组织病料进行检测，结果能直接从鼻腔病料中扩增出预期的片断，而 肺组织中不能，需要培养过后才能扩增出预期的片断。对从重庆四川送检或采集的45 头疑似病猪分别进行扁桃体组织、肺组织检测及细菌分离鉴定，其中从12头猪的扁桃 体和肺组织中扩增出了相应片段，同时也分离到了APP细菌，其中4／12为血清型l，8／12 为血清型7。PeR鉴定结果与细菌分离鉴定结果完全一致。 以上试验结果表明本试验建立的多重PCR检测方法，敏感性高，特异性强，适合 于胸膜肺炎放线杆菌的快速定性诊断，适合于血清型l，2，6，7的鉴别诊断及流行病 学调查。 夕 A } 关键词：胸膜肺炎放线杆菌；多重PCR；外膜脂蛋白：荚膜多糖；诊断 ● 善 J and ofMulti—PCRforDetectionof DevelopmentApplication Actinobacillus pleuropneumoniae Serotypel，2，6，7 I， Chen ●、 Hua-mei(Preventiveveterinarymedicine) Directed Xin-tian ● byprof．Wen Abstraet the Actinobacilluspleuropneumoniae(APP)isetiologicalagentofporcine ischaracterizedfibrinousand by pleuritishemorrhagic，highly pleuropneumonia，which causedalotofeconomiclosses contagious It ofporcine is pneumonia production．It difficultin and becauseAPPhave andeachother diagnose preventation manyserotype has no this