第二十二章细胞因子测定技术.pptVIP

第十五章 免疫细胞功能检测技术 免疫细胞分类 能识别特异性抗原，一旦被激活则显示特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等。 能捕获抗原，处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞功能检测 四、K细胞功能检测 淋巴细胞 T细胞（负责细胞免疫功能） B细胞（执行体液免疫功能） NK和K细胞（非特异性免疫作用） 一、T细胞功能的检测 T细胞增殖试验 T细胞介导的细胞毒试验 （一）T淋巴细胞增殖试验 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 （1）形态学检查法 方法学评价： 优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。 （2）3H-TdR掺入法 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 (二) T细胞分泌功能测定 体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。 （三）T细胞介导的细胞毒试验 (四) 体内试验 特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验 二、B细胞功能检测 B细胞增殖能力的试验 B细胞抗体形成功能的检测 (一)B细胞增殖能力的试验 抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA (二) 溶血空斑试验 1. 原理： 3．临床应用与评价 溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。 (三)　酶联免疫斑点法 1．原理： 2．应用与方法学评价： 该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点： 稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。 (四)　体内试验 体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。 三、NK细胞活性测定 一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能的检测 (一) 趋化功能检测 1.原理： 2. 方法学： 琼脂糖平板法 (二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法： 2. 溶菌法 二、巨噬细胞功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 (三)巨噬细胞溶酶体酶的测定 1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法 激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。 反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。 滤膜渗透法（Boyden 小室法） 3．NBT还原试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (一)炭粒廓清试验 (二)吞噬功能检测 2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法 (五) 巨噬细胞促凝血活性测定 (四) 细胞毒作用测定 用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。 * * 第一节 淋巴细胞功能检测技术 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 1. 原理： 无 有或无 有或