生物技术制药疫苗及其制备技术.ppt

免疫印迹法（Western blotting ） 根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法 具有 SDS的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术 常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。 * 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 * 思考题 1. 简述疫苗的概念、组成及作用原理。 2. 简述各类疫苗的主要特点及制备方法。 3. 何为治疗性疫苗？与预防性疫苗的区别？ 4. 设计并简述禽流感H5N1疫苗的主要制备流程。 * 五、治疗性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T 基本步骤: 采集患者的外周血单个核细胞，培养生成抗原提呈细胞（树枝状细胞) 树枝状细胞在培养条件下用基因工程制备的融合蛋白（PA2024）孵育, 这种融合蛋白由两部分组成: 抗原-前列腺酸性磷酸酶（PAP），PAP能在95%的前列腺癌细胞中表达; 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF), 一种能帮助树枝状细胞成熟和激活的免疫信号因子 收集经融合蛋白孵育刺激的树枝状细胞等免疫活性细胞重新注入患者体内, 激发体内产生针对携带PAP抗原的前列腺癌细胞的抗肿瘤免疫反应 * 第四节 疫苗生产的质量控制 * * * * * * 一、原材料的质量控制 （一）生产用水 （二）器材、溶液等原材料 （三）动物源的原材料：SPF级 （四）菌种和毒种 （五）细胞 * （四）菌种和毒种 * * 二、生产过程质量控制 《中国生物制品规程》 GMP 人员素质、卫生及无菌的要求 * * * 三、疫苗产品的质量控制 （一）理化检定 检测疫苗中的有效成分和无效有害成分 物理性状检查 蛋白质含量测定：基因工程疫苗 防腐剂含量测定 纯度检查 其他：水分、佐剂等 * 三、疫苗产品的质量控制 （二）安全性检定 菌、毒种和主要原材料的检查 半成品检查 成品检查 * 三、疫苗产品的质量控制 （三）效力检定 免疫力试验 活疫苗的效力测定 血清学试验 * * * 第五节 疫苗产业特点及应用概况 疫苗行业是生物医药领域中比较高端的细分领域，具有较高的技术壁垒、资金壁垒和政策壁垒。 ?全球疫苗85%的疫苗市场被葛兰素史克、赛诺菲安万特、默克、惠氏和诺华这五家跨国制药企业所垄断。 我国疫苗市场规模已接近100亿元，全世界排名前10位的制药公司已全部进军中国市场。 * 一、疫苗研发生产特点 需全程监管 研发是疫苗供应体系的核心 周期长、投入高、风险大：10年以上 一条生产线只生产一种产品 对大规模产业化生产技术的需求高 投入产出比高 * 二、我国疫苗分类及需求 政府免费向公民提供、公民依照政府规定接种 公民自愿接种、自费负担 * 三、我国疫苗行业现状 流通领域的开放和计划免疫范围的扩大，加强计划疫苗需求，激活有价疫苗市场 加大传统疫苗的技术改良与新型疫苗品种的开发力度 展开从产品竞争到企业竞争的双重竞争 * 四、接种疫苗的效果 1. 人用疫苗 彻底消灭天花 基本消灭脊髓灰质炎 麻疹、百日咳、白喉、流行性乙脑炎、流行性脑脊髓膜炎等发病率大幅下降 2. 兽用疫苗 * 五、面临的形势和挑战 全球性需求和发展加快 关键技术、装备研发、大规模生产措施及人兽共患病方面较薄弱 管理分散、整体保障水平与实际需求有差距 供应能力大而不强 * TED（technology, entertainment, design） 美国的一家私有非营利机构 以每年3月的TED大会著称，会议宗旨是“用思想的力量来改变世界”。 在美国召集科学、设计、文学、音乐等领域的杰出人物，分享关於技术、社会、人的思考和探索。 TED演讲的特点是毫无繁杂冗长的专业讲座，观点响亮，开门见山，种类繁多，看法新颖。 * 血凝抑制实验 一种测定抗原或抗体的技术 血凝现象：有血凝素的病毒能凝集人或动物红细胞 血凝抑制试验：血凝现象被相应抗体抑制 * 单向免疫扩散试验 将一定量抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中，抗原扩散过程中与板中抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环 沉淀环直径或面积与抗原浓度呈正相关 用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即定量检测未知标本的抗原浓度 * 酶联免疫吸附测定（ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA ） 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面