用密度法分离.ppt

双光源系统流式细胞仪 无论每秒检测数量为多少，颗粒经过检测区的速度是衡定的 流式细胞仪标本准备 染色的一般原则及方法 操 作 从组织获取淋巴细胞 将样本置于陪替氏培养皿，加入15ml BSA-PBS； 将样本切成3-4mm3大小，用镊子将其分离； 将样本经滤网过滤，用密度法分离、提纯淋巴细胞。 方 法： 其他类型细胞 在组织中提取细胞通常使用酶消化法。同样对于不同组织处理方法也各异，以下是讲述通用的胶原酶消化法制备组织细胞。改良后的此法尚可用于制备人、鼠上皮细胞。 材 料 用5ml的吸样管反复吹打，制成单个细胞悬液； 使用35um滤网过滤，300g离心5分钟； 用PBS或细胞培养液重悬样本；对于某些样本过滤后仍有小块组织，重复第5步获取细胞，重复第7步； 用含0.15%胰酶、0.02%DNase 1不含Ca、Mg的HBSS重悬， 37oC孵育一段时间加入1%BSA或5%FBS，灭活酶活性。 细胞培养 许多原代细胞和培养细胞系，都为贴壁型生长。通常先用胰酶处理获得单细胞悬液，需注意消化过度会损害细胞，特别是改变其表面抗原标记。 准备单细胞悬液 1.仪器和试剂： 0.25%r EDTA,pH 7.2 0.25% 的胰酶 10%血清的培养液 2.方法： a. PBS洗涤细胞； b.