海洋大分子的分离纯化及研究方法.ppt

* * * 原因 * 超声，细胞裂解液，液氮 * 接近细胞生理条件（比如 pH≈7.0，0.15 mol/L NaCl）对于提取大多数蛋 白质都很有效。因此常常选用 pH 7.0~7.5，20~50 mmol/L 磷酸盐缓冲液或 pH 7.5， 0.1 mol/L Tris-HCl（含 0.05~0.15 mol/L NaCl）缓冲液提取蛋白质 * * 为避免提取过程中蛋白质的降解，提取一般为低温环境操作，另外加入蛋白酶抑制剂也 能有效防止蛋白质的降解（蛋白酶抑制剂包括 PMSF、EDTA，antipain和 leupeptin 等）。 * 7%PEG沉淀血清蛋白，然后在TBS中溶解蛋白 * 对于可溶蛋白，溶剂是水，疏水侧链因此被包埋在蛋白质内部。最终的结构是最适合周围溶液的热动力学这种的结果。 虽然疏水氨基酸大多被包埋在球形蛋白内部，有些则暴露在外，在蛋白质表明形成疏水区域， * 在高盐浓度下，暴露于分子表面的疏水性残基才能与疏水性固定相作用。用高浓度盐溶液洗脱时，会先被洗下来。当盐溶液浓度降低时，疏水作用强的物质才会随后被洗下来。 * * （2）有机溶剂沉淀法 与盐析法相比，有机溶剂沉淀法的优点是：①分辨能力比盐析法高，即一种蛋白质或其他溶质只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀。 ②沉淀不用脱盐，过滤比较容易（如有必要，可用透析袋脱有机溶剂）。