结核病细菌学检验的标准化与新技术进展海淀.ppt

结核病细菌学检验的标准化与新诊断技术进展 王甦民 2012年4月 强化结核病实验室诊断标准化的必要性 1、全球结核病控制的三大挑战：耐药结核病、HIV/艾滋病合并结核病、移民（流动人口） 2、我国结核病疫情依然严重 3、目前结核病实验室诊断技术的不足 分类 结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。 结核分枝杆菌特点 结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10-20小时 细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚，含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。 抗酸性是分枝杆菌的重要特征。 结核病细菌学检查的重要作用 细菌学检查是结核病最客观、最科学和最重要诊断方法和流行病学研究工具。因此结核病的实验室检验仍然面临着较多的问题。 细菌学检验存在的问题 不易于标准化 操作误差较大（可达到30%） 1、个人操作误差 2、标本性状 3、标本来源 对结果的理解差异可影响检验结果对临床治疗的参考或指导意义。 主要的细菌学检验技术 1、痰涂片抗酸染色、镜检技术 2、分枝杆菌分离培养技术 3、分枝杆菌快速培养技术 4、药物敏感性实验技术 5、分枝杆菌菌种鉴定技术 标准的痰涂片抗酸染色、镜检技术 标本的收集，特别是痰标本的采集、保存 制片和染色过程的标准化 读片操作的熟练程度和标准化 对结果的理解 痰标本的采集、保存和运送 脓样、干酪样或脓性粘液样痰为合格标本，痰量应为3-5毫升。 难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。 容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号及日期。 不能及时检验的痰标本应置4C冰箱保存， 如需转运，外送前要认真核对检验单与痰瓶上标注，放在专用的转运箱内运送。 标本的采集 标本留取方法 痰标本的留取应在医护人员的指导下进行。医护人员应告知病人如何咳痰，合格的痰标本是深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物，并说明唾液检出的可能性很小。 检验人员检查痰标本的性状，并在登记本和检验报告单上注明（按干酪痰、血痰、黏液痰和唾液分类登记）。 如何正确留痰 查痰对于结核病的诊断是非常重要的，通过痰检可以知道您是否痰中带菌。如果痰中带有结核菌说明您患有肺结核，具有传染性，应该及时遵医嘱治疗。 送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下列要求和方法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取1～2口痰，请不要将1口痰分开放到2或3个痰盒中。 正确的咳痰方法： 1、咳嗽前应缓慢地深吸气，吸气后稍屏气片刻。 2、躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。 3、咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气，可连续咳嗽三声。 4、停止咳嗽后，收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。 5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。 * 注意：部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽，您可以尝试缓慢或分几次吸气，争取肺泡内充分充气，以增加咳嗽的效率。在这一过程中，要注意动作的连贯性，一气呵成。同时，也可以叩击前胸，或由家属协助叩击后背胸壁。这样震动支气管内的分泌物，能够增加咳嗽排痰的力度。 直接痰涂片检查法 萋尔-尼尔逊氏（Ziehl－Neelsen）抗酸染色法 （热染法） 细菌学常规检查 —直接涂片法 操作流程 载玻片 （一）新载玻片必须经95%乙醇脱脂，检查无划痕后 方可使用。 （二）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 （三）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复用于AFB检查。 （四）载玻片正面一侧1/3处标注实验室序号(如使用的载玻片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可使用2B铅笔在磨砂面上直接书写)。 （五）载玻片正面另一侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10×20 mm的卵圆形痰膜。 染色 （一）严格按照操作规范完成染色程序。 （二）染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。 （三）将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚，或染色过程有误。 （四）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10%。 （一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰膜。 （二）仔细观察300以上的视野。 （三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读量一般不应超过25张。 （四）连续阅读10～12张玻片后，应休息20分钟左右。  痰涂片抗酸菌浓度与阳性结果机率 检出菌数