蛋白质芯片研究进展.ppt

* 但是,蛋白芯片技术还只是在研发阶段,并没有转化为商品进行大量的使用,是因为该技术仍存在许多问题. 成本过高,目前的生物芯片技术需一系列昂贵的尖端仪器,如光刻机器、和激光共聚焦显微器等设备, 如Affymetrix的一套系统需要13. 5万美元,对普通的实验室来说开支较大,是生物芯片技术推广的一大障碍. 其次是芯片的标准化问题,即如何将不同实验室、不同操作人员做出的结果进行统一化、标准化, 如何提高芯片的特异性、简化样品制备和标记操作程序、增加信号检测的灵敏度和消除芯片背景对于结果分析的影响等等,这些都是亟待解决的问题 * 蛋白质芯片还面临着诸多挑战，未来的发展重点集中在以下几个方面 人类基因组大规模测序工作已经完成，随着以功能基因组学和蛋白质组学为主要研究内容的后基因组时代来临，蛋白质芯片作为检测蛋白质存在和运动变化的高效工具，必将发挥越来越大的作用 ；第一代蛋白检测芯片将主要依赖于抗体和其他大分子，显然，用这些材料制备复杂的芯片，尤其是规模生产会存在很多实际问题，理想的解决办法是采用化学合成的方法大规模制备抗体。 提高芯片制作的点阵速度；提供合适的温度和湿度以保持芯片表面蛋白质的稳定性及生物活性。 蛋白质芯片 马晶 DNA DAY 2010-06-30 内容提要 蛋白质芯片概述 蛋白质芯片的关键技术 蛋白质芯片的应用 展望 Gel electrophoresis, northern/western blot (fluorescence/radio active label) X-ray crystallography 2D - mass spectrometry Protein microarrays SELDI MS protein chips Methods for Protein Analysis 蛋白质芯片的定义 生 物 芯 片 基因芯片 蛋白质芯片 微流控芯片 蛋白质芯片, 又称蛋白质阵列或蛋白质微阵列，是指以蛋白质分子作为配基,将其有序地固定在固相载体的表面形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质或其他它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白之间或蛋白与其它分子之间的相互作用关系。 蛋白质检测芯片 蛋白质功能芯片 蛋白质芯片的分类 蛋白质芯片的关键技术 提出生物学问题 （实验目的） 样品预处理 （重组蛋白，制备一、二级抗体， 荧光标记，配蛋白印记缓冲液） 生化反应 化学偶合，加底物， 反应温度和时间， 冲洗条件 检测 （荧光和比色扫描或拍照， 参数设置） 数据分析和建模 （图象量化，标准化， 采集蛋白信息，建立模型） 1 2 3 4 5 蛋白质芯片制备 6 蛋白质芯片的制备 固相载体及其处理 载体（滴定板、滤膜、凝胶、载玻片） 蛋白质的预处理 选择具有较高纯度和完好生物活性的蛋白进行溶解 点制微阵列 可使用点制基因微阵列的商品化点样仪或喷墨法等 固定微阵列上的蛋白样点 膜为载体：芯片放入湿盒，  37°C 1h 载玻片为载体：化学修饰产生醛  基固定蛋白 微阵列的封闭主要封闭试剂：BSA或Gly 蛋白质芯片比较 表面 蛋白固定方式 优点 缺点 PVDF 吸附 无需蛋白修饰过程，高结合容量 非特异吸附，分布随机 Nitrocellulose 吸附 无需蛋白修饰过程，高结合容量 非特异吸附，高背景，低密度 无需蛋白修饰过程，高密度， 非特异吸附，分布随机 高分辨检测 Epoxy-activated 高密度，高分辨检测 分布随机，表面有吸附 PDMS nanowell 高密度，适合复杂的生化分析