GB/T 30957-2014饲料中赭曲霉毒素A的测定　免疫亲和柱净化-高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国彖标准 GB/T 30957—2014 饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 Determination of ochratoxin A in feeds — High performance liquid chromatography with immunoaffinity column clean-up 2014-07-08 发布 2015-01-10 实施 GB/T 30957—2014 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）归口。 本标准由农业部饲料质量监督检验测试中心（南昌）、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研 究所 ［国家饲料质量监督检验中心 （北京）］、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所负责 起草。 本标准主要起草人:饶辉、文虹、周华娇、符金华、徐田放、饶正华、尹腾桂、杨琳芬、邢磊、赵薇娜、 赵志辉° T GB/T 30957—2014 饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化■高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-高效液相色谱测定方法。 本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中赭曲霉毒素A的测定。 本标准定量限为5.0 卩g/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195动物饲料试样的制备 3原理 试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有赭曲霉毒素A特异抗体的免疫亲和 层析柱层析净化，用PBS缓冲液和纯水清洗，甲醇洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪测 定赭曲霉毒素A的含量。 4试剂 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯试剂，用水符合GB/T 6682中二级用水的规定。 4.1甲醇:色谱级。 4.2乙月青：色谱级。 4.3氯化钠。 4.4磷酸氢二钠。 4.5磷酸二氢钾。 4.6氯化钾。 4.7盐酸。 4.8碳酸氢钠。 4.9 吐温-20(Tween-20) 0 4.10乙酸。 4.11清洗缓冲液:将25 g氯化钠(4.3),5 g碳酸氢钠 (4.8)溶于水中，加入0.1 m 吐温-20(4.9),加水 稀释至1 o 4.12 PBS缓冲液:称取8.0 g氯化钠(4.3) 、1.2 g磷酸氢二钠(4.4) .0.2 g磷酸二氢钾(4.5).0.2 g氯化 钾(4.6)溶于900 m 水中，用浓盐酸(4.7)调节pH值至7.0,用水定容为1 o 1 GB/T 30957—2014 4.13 提取液 ：甲醇+水 (8 + 2)：将800 m 甲醇(4.1)与200 m