GB/T 35912-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 35912—2018 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光RT-PCR检测方法 Real-time RT-PCR method for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2018-02-06 发布 2018-09-01 实 发布 GB/T 35912—2018 ■ r ■ —— 刖 弓 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中国农业科学院上海兽医研究所、中华 人民共和国深圳出入境检验检疫局、湖南圣湘生物科技有限公司、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：张强、李健、熊炜、童光志、赵和平、李树清、花群义、杨忠苹、李国新、王巧全、 王艳、林颖峥、蔡开妹、喻正军、林祥梅、吴绍强。 T GB/T 35912—2018 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测的操作方法。 本标准适用于猪繁殖与呼吸道综合征病毒美洲型毒株核酸检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 25172猪常温精液生产与保存技术规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Real-time RT-PCR :荧光反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcript polymerase chai re­ action) Ct值:每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数(cycle threshold) RNA：核糖核酸(ribonucleic acid) Taq 酶：Tag DNA 聚合酶(Tag DNA polymerase) TE 缓冲液:Tris-EDTA 缓冲液(Tris-EDTA buffer) DEPC :焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) PRRSV :猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus) PES：磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution) 4仪器 4.1荧光PCR检测仪。 4.2高速台式冷冻离心机 ：可控温至4 °C 、离心速度可达12 000 r/mi 以上。 4.3组织研磨器或者研钵。 4.4 普通冰箱：2 °C