12基因工程的操作程序.pptVIP

复习回顾 8、载体主要有哪几类？其中，最常用的是？它的本质是？ 9、载体必须具备的四个条件是？ 10、写出限制酶切割后的黏性末端。 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 复习回顾 1、基因工程的基本操作程序的四个步骤是？核心是？ 2、目的基因指的是什么基因？ 3、获取目的基因常用的三种方法是？其中人工合成法又包括哪两种? 4、基因文库包括哪两类？ 5、PCR的原理是？PCR全称是？PCR扩增过程中的解旋方式是？PCR需要的条件有？ 6、基因表达载体的构建的目的是？ 7、一个基因表达载体的组成包括哪几部分？ 8、标记基因的作用是？ 9、启动子，终止子的位置，作用？起始密码子，终止密码子呢？ * 1、基因工程又称为？基因工程的原理是? 2、基因工程中用到的工具中，“分子手术刀”是？来源是？其作用是？体现了酶的什么特性？作用部位是什么键？ 3、限制酶切割之后的结果是产生？从中轴线两侧切割得到的是什么末端？从中轴线处切开呢？ 4、获得目的基因需要切几个切口？产生几个黏性末端？切割质粒呢？ 5、“分子缝合针”是？根据什么分为两大类？哪两大类？这两类酶的区别是？ 6、DNA连接酶连接的是？DNA聚合酶连接的是？ 7、DNA连接酶作用于什么键？ 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 真核细胞的基因结构（补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 基因工程的基本操作程序主要包括哪几个步骤？ 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 问题1 一：目的基因的获取 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 1.目的基因主要是指___________________ 编码蛋白质的基因 目的基因指的是： 也可以是具有调控作用的因子 获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、人工合成目的基因 反转录法 化学合成法 1.基因文库概念 2.基因文库类型 基因组文库 部分基因文库 （包含一种生物的所有基因） （包含一种生物的一部分基因） (一)从基因文库中获取目的基因 3.基因组文库的构建 提取某种生物的全部DNA 用适当的 限制酶 一定大小的DNA片段 将DNA片段 与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 4.cDNA文库的构建 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体 连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA 聚合酶 导入受体菌 中储存 两种基因文库的主要区别如下表（课本P10） 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 基因多少 部分基因 全部基因 物种间的基因交流 可以 部分基因可以 总结 1、概念：PCR全称为________________，是一项在生 物____复制_____________的核酸合成技术 3、条件： 2、原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 (二)利用PCR技术扩增目的基因 模板 （目的基因） 原料(脱氧核苷酸) 引物（一小段单链DNA） 耐高温的DNA聚合酶（Taq酶） 温度控制 4、操作前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。 6、结果 ： 5、扩增形式： 指数形式（2n） 在短时间内大量扩增目的基因 7、过程： a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作 用下，_____断裂，形成___________ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与 DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物开始进行碱基互补配对，合成与 模