ABI荧光定量PCR中文说明书与培训资料ABIPrism7300安装培训.pptVIP

ABI Prism7300/7500实时定量PCR仪用户培训讲义 ABI Prism 7300 * 美国应用生物系统中国公司广州代表处 2005年 用户培训流程： 4、报修请拨打全国的维护中心电话：8008100192。 1、安装完毕，工程师按照SOP培训仪器和软件的操作； 2、具备一定经验的用户，建议参加AB公司的培训班，接受应用 及故障排除培训； 培训班在北京、上海、广州等地定期举行，每台仪器有两个免费名 额；培训班日程表每半年更新一次，可以到AB公司的网站上查询：。 3、鼓励用户与AB公司的应用专家直接联系，协商进行现场标准 品和未知样品的实验培训； AB产品线的联系方法： 陈云地：021407，8008203939 chenyd@ 培训内容 定量PCR的化学原理 传统PCR的过程： 三个步骤 一、变性： DNA双链结构被分开；94oC-96oC 二、复性： 引物结合到DNA链上；40oC-65oC 三、延伸： 新DNA合成。72oC 传统PCR的过程： 2 4 8 16 传统的检测方法使用的是“终点法”：即在反映完成以后再进行检测，如跑胶。 传统PCR的检测方法： 实时荧光定量PCR 实时 每个循环进行测量。 荧光 在反应体系中加入某些荧光物质，荧光物质所发出的信号的强度与体系中的DNA的多少有一定的对应关系，并且信号强度能随着体系中的DNA浓度的改变而改变。 PCR 类似于传统的PCR。 入射光 染料分子 出射光 荧光物质在接受了外界光的照射后，能够向外发射波长比入射光长的光 探针法： High Energy molecule Low energy molecule 能量不同的两个染料分子在空间距离上很接近时，在受到外界光照射的时候，能量高的分子就会将吸收到的能量转移至能量低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已经降低，高能的分子就不会向外发光，所以，对于高能分子来说，光就好像是被淬灭了一样。 能量转移： 探针法： High Energy molecule Low energy molecule 探针法： 当两个染料分子在空间位置上距离很远时，能量高的分子所吸收的能量就不能转移至能量低的分子上，这样，两个分子就会各自向外发出自己特定波长的光。 探针： 一段DNA序列，能完全跟实验的目标DNA中的一段互补，两端标上染料分子。 探针法： 每产生一个新的片段，就产生一个荧光分子 探针法： 1 2 4 8 荧光值的不断增加，代表着体系里面的DNA量越来越多。 染料法： 染料法的优缺点： 实时定量PCR的结果计算 所有的样品里的 DNA的量都是在 按每个循环两倍 的速度增加； 当所有的样品的报 告荧光的强度都达 到某一个数值时， 各个样品所经历过 的循环数与样品的 起始浓度有关，起 始浓度越高，所经 历的循环次数越少。 未知样品1： 未知样品2： 已知浓度的样品1： 已知浓度的样品2： 已知浓度的样品3： 已知浓度的样品4： 已知浓度的样品5： 1250 2500 5000 10000 20000 ？ ？ 各个样品的荧光值都达到“200000”时所经过的循环数： 14 15 16 17 18 15 17 浓度 例子： 循环数 浓度 lg1250 lg2500 lg5000 lg10000 lg20000 14 15 16 17 18 15 lg10000 17 lg2500 例子： 通过标准曲线，我们可以算 出未知样品的起始浓度是： 未知样品1： 未知样品2： 2500 10000 15 17 例子： 7300的功能一览： 光源 入射光滤光片 半透镜 样品架 四色滤光片组 检测器 7300光路图 光源 入射光滤光片 半透镜 样品架 五色滤光片组 检测器 7500光路图 7300选用的荧光组合 *