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2019-06-25 发布于河北
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Alcian blue染色protocol

软骨细胞染色protocol?? Protocol?1:? 一．用Acetic?acid配制1%?Alcian?blue染色液 Alcian?blue?8GX 1g? Acetic?acid 3ml? DI?water 97ml? ? 二．操作步骤:? 1.Fix?the?cells?with?10%?buffered?formalin?for?10?min?at?room?temperatue 2.Rinse?the?slides?in?water,?stain?with?Alcian?Blue?pH?2.5?solution?for?30?min?at?room?temperature.? 3. Wash?the?slides?in?running?tap?water?for?5?min,?rinse?in?DI?water.? 4. Counterstain?in?Nuclear?Fast?Red?for?5?min?at?room?temperature.? 5. Wash?slides?three?times?in?DI?water.? ? Protocol?2:? 一．用0.1M?HCl配制1%?Alcian?blue染色液 Alcian?Blue?GX ?1g? 0.1M?HCl? 100ml? ? ? 二．操作步骤:? 1)Fix?the?cells?with?10%?buffered?formalin?for?10?min?at?room?temperatue 2) Rinse?3?times?with?1x?PBS? 3) Stain?in?alcian?blue?solution?for?30min? 4) Rinse?with?0.1M?HCl?(solvent?of?stain)?x1 5) Rinse?twice?with?1x?PBS? 6) Keep?in?ddH2O?or?PBS 阿尔新蓝（阿利新蓝染色）Alcian blue 8GX 染色：液体配置： 1: 0.1HCL配置方法：0.9毫升浓盐酸加入100ml超纯水中2： 3%冰醋酸配置方法：3ml冰醋酸加如97ml超纯水中3: 1%Alcian blue 配制：1g阿尔新蓝入3%冰醋酸溶液100ml4： 4%多聚甲醛配制: 4g多聚甲醛粉剂加入100MlPBS充分溶解（多聚甲醛比较难溶解，需加热磁力棒搅拌）染色方法： 1：吸出旧培养基，PBS漂洗3次，每次5分钟2: 4%多聚甲醛固定30分钟（室温）3：PBS漂洗3次4: 0.1N HCL溶液浸洗5分钟时PH值降至1.05：阿尔新蓝染色过夜6： 0.1N HCL漂洗3次，每次5分钟，去除背景。