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植物组织培养 主讲: 余志坚（讲师） 陈传红（讲师） 东华理工大学 生物系 2010.3 余志坚 联系方式： 科技楼210 手机E-mail:zhjyu60@126.com 内容提要： 一、植物组织培养的基本概念 二、植物组织培养的发展历史 三、植物组织培养的应用及展望 四、教材及参考书 五、网络资源与信息 一、植物组织培养的基本概念1、植物组织（离体）培养 (Plant tissue culture; Plant culture in vitro ) （广义）离体的植物细胞及原生质体、组织、器官----外植体在人工控制的无菌环境条件下再生细胞、组织继而形成完整植株的技术。（狭义）以植物组织为外植体进行培养。 2、植物组织培养的特点 主要特点：用微生物学实验手段，进行植物离体无菌操作。 1）整个过程都是在无菌条件下进行； 2）人工控制条件下； 3）人工培养基； 4）外植体； 5）植物无性繁殖——植物克隆； 6）在封闭的微环境下进行。 3、主要研究内容 1）组织培养（即狭义的植物组织培养） 分生组织、形成层组织、薄壁组织、韧皮组织等 2）器官培养 植物六大器官的培养 3）胚胎培养 幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房等 4）细胞培养 生殖细胞（花粉培养）、体细胞等 5）原生质体培养 原生质体 6）其他 次生代谢物生产、脱毒培养、人工种子等 4、研究任务 细胞、组织、器官等在离体培养下的： 营养条件、激素因素、培养条件 形态发生和代谢规律 脱毒方法与机理 再生植株群体的遗传稳定性 种质资源离体保存的机理与方法 细胞离体融合机理与方法（新品种培育） 二、植物组织培养的发展历史 1、理论和实验开创时期（1902— 1930） 1838－1839年，德国科学家Schleiden 和Schwann提出“cell concept”，奠定了组织培养的理论基础。 1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。为证明该理论，他采用了野芝麻和紫鸭草的叶片栅栏组织细胞、髓细胞等为材料，在人工培养基中培养，没有成功。 但他预言：在未来，人们可以从营养细胞培养出人工胚。 1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。离体胚可以充分发育，并且提前萌发形成小苗。这是世界上胚胎发育最早获得成功的一例。 1922年，德国的Kotte和Robbins分别报道了根尖离体培养获得某些成功。Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。 1925年，Laibach从亚麻种间杂种不能成活的种子中分离幼胚，并是杂种胚发育成完整植株。 2、发展时期（20世纪 30—50年代） 1933年，我国李继侗和沈同进行银杏胚的离体培养时，发现银杏胚乳提取物的生理作用，首次报道了利用天然提取物进行植物组织培养。 1934年，荷兰植物学家F.W. Went发现生长素，这是人类首先认识到的一类生长调节物质。 1934年，美国的White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系。 1946年，我国学者罗士韦在培养菟丝子茎尖时，发现有花的形成，从而导致人们利用该技术诱导花芽形成的研究。　　 1948年，美国科学家F. Skoog和我国植物生理学家崔徵发现了腺嘌呤或腺苷可解除培养基中生长素对芽形成的抑制作用； 1952年，法Morel等将感染病毒的大丽花茎尖切离培养，获得去病毒植株； 1953年，Muir成功进行万寿菊和烟草细胞悬浮培养； 1956年，Miller和Skoog在鲱鱼精子中发现激动素（KT）； 1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株。 三、植物组织培养的应用与展望 1、植物离体快繁 特点：繁殖系数大，周年生产，繁殖速度快，苗木整齐，可工厂化生产。 已进入工厂化生产的植物有：香蕉、葡萄、草莓、芦荟、兰花、马铃薯甘蔗等几十种花卉、蔬菜等。 3、新品种培育 培育远缘杂种 离体选择突变体 单倍体育种 番茄+马铃薯 在组织培养容器内开花的AP1转基因矮牵牛(左)和从未开化的转基因对照植株(右) Establishment of shoot cultures and propagation of shoots by different bioreactors. Methodology of bioreactor-based micropropagation. Drawing schematic illustration