第二十二章免疫学检测技术.ppt

* 细 胞 治 疗 细胞疫苗 过继免疫治疗 造血干细胞移植 1 瘤苗 2 基因修饰的瘤苗 3 APC疫苗 1）活瘤苗： 2）灭活的瘤苗 3）异构的瘤苗 4）AId瘤苗 5）分子瘤苗 1 骨髓移植 2 外周血 3 脐血 * LAK（lymphokine activated killer cells）细胞——淋巴因子活化的杀伤细胞。是将外周血淋巴细胞在体外经过IL-2培养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的杀瘤特性。其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无MHC限制性。主要为NK细胞。 TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)细胞——肿瘤侵润淋巴细胞。是从实体瘤组织中分离得到的，经体外IL-2培养后获得比LAK细胞更强的杀伤活性。 过继免疫治疗 * 生物应答调节剂 化学制剂：1、左旋咪唑 2、西咪替丁 微生物制剂：1、卡介苗（BCG） 2、短小棒状杆菌 3、微生物提取物 中药制剂： 黄芪、人参、 枸杞子等 生物应答调节剂与免疫抑制剂 免疫因子：1、转移因子 2、免疫核糖核酸 3、胸腺肽 适应症：免疫功能低下的患者 （1）恶性肿瘤 （2）免疫缺陷病 （3）传染病 副作用：较轻 * 免疫抑制剂 化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙 * 免疫抑制药物的适应症和副作用 适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者 1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素 副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷、 严重感染、 肿瘤 * * B细胞功能测定 抗体含量测定 溶血空斑试验 可通过单项琼脂扩散法、ELISA、速率比浊法等测定标本中各类Ig的含量。 绵羊红细胞(SRBC)免疫动物 4天后取出动物脾脏，在脾细胞悬液中含有抗SRBC的浆细胞 脾细胞与SRBC在适量琼脂糖液中混匀 在抗体形成细胞周围出现溶解的透明区，即溶血空斑。1个空斑区代表1个浆细胞 通过记录溶血空斑的数目可知抗原特异性B细胞的数目 加入新鲜补体，倒入平皿中培养 * 细胞毒试验 51Cr释放法 乳酸脱氢酶释放法 细胞染色法 靶细胞被杀伤后，向体系中加入台盼兰，可进入膜破损的细胞内，将细胞染成蓝色。活细胞拒染而不着色。 * 凋亡细胞检测法 琼脂糖电泳法 正常细胞基因组DNA 凋亡细胞 TUNEL法 在细胞中加入末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)和生物素标记的核苷酸 TdT能在游离的DNA3’端缺口连接标记的核苷酸 加入亲和素-酶复合物，在DNA断裂处显色 流式细胞术 Annexin V PI 凋亡早期 凋亡晚期 坏死期 * 巨噬细胞吞噬试验 吞噬功能测定 硝基蓝四氮唑(NBT)试验 NBT在杀菌过程中产生反应性氧中间物，其中超氧阴离子能使被吞噬进细胞内的NBT还原成不溶性蓝黑色甲臜颗粒，沉积于胞浆中。光镜下计数NBT阳性细胞可反映PMN的杀伤功能。 将待测mf与鸡红细胞混合温育后，鸡红细胞被mf吞噬，根据吞噬百分率确定mf吞噬能力。 吞噬百分率=吞有红细胞的mf/mf总数 * 细胞因子检测 生物活性检测法 免疫学检测法 夹心ELISA或ELISPOT 荧光素标记抗体染胞内细胞因子，FACS分析 细胞增殖或增殖抑制法，如细胞因子依赖性或抑制性细胞株 细胞病变抑制法，如干扰素抑制病毒感染性细胞损伤 * 检测B细胞产生的抗体 检测T细胞产生的CK 酶联免疫斑点试验-ELISpot * 第二十三章 免疫学防治 * 免疫预防 * * 特异性免疫获得方式 自然免疫 机体感染病原体后建立的免疫——自然主动免疫 或胎儿、新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体而产生的免疫——自然被