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非可控性结肠炎癌变过程的转录组动态变化及其分子机制研究 分类号?? 密级?? 博士学位论文 非可控性结肠炎癌变过程的转录组 动态变化及其分子机制研究作者姓名 唐岸柳 学科专业 内科学 学院系、所 中南大学湘雅三医院 指导老师 沈守荣教授 答辩委员会主席 论文答辩日期立:
: 中南大学 二。一二年五月●原创性声明 本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢 的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名: 日期:丝年』月日 堡缉 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文, 允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内 容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》, 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名:阜辑导师签名谴速日期:坐年鱼月日驻‖::。‘謦『本课题受如下基金资助 国家自然科学基金项目: 湖南省研究生科研创新项目: “工程”创新人才培育基金:博士学位论文 中立摘要 摘要 【研究背景】 非可控性炎症在肿瘤的启动、促进与进展中发挥重要作用。结直 肠癌是世界第三大癌,严重威胁人类健康。非可控性的结肠炎症,如 溃疡性结肠炎,可显著增加罹患结直肠癌的风险,且结直肠癌的发生 与炎症的严重程度、范围等因素呈正相关。结肠炎相关性癌与传统意 义上的结直肠癌相似,为一涉及多基因、多步骤、多阶段的复杂过程。 而与经典结直肠癌的“腺瘤.腺癌”序列不同,溃疡性结肠炎发展至 结直肠癌经历了“炎症.不典型增生.癌症”的序列演进。目前对溃疡 性结肠炎相关性结直肠癌发病机制的研究才刚刚起步,尚缺乏针对连 续病变阶段的动态组学研究,对其分子机制及其调控网络的认知电不 全面。为从全基因组转录水平与蛋白表达水平两个层面全面、深入地 探讨“炎.癌链”中的分子事件及其交互作用网络,本研究在构建化学 诱导的非可控性结肠炎及其相关性结直肠癌的小鼠模型基础上,采用 全基因组表达谱基因芯片技术结合生物信息学分析、炎症因子抗体芯 片蛋白芯片技术、实时定量以及免疫组织化学法,对“炎 症一不典型增生一癌症”序列演进过程的转录组及“炎.癌”调控网络中 的关键信号通路与分子的动态变化规律进行分析归纳,旨在为非可控 性结肠炎及其相关性结直肠癌的发病机制和临床诊治提供理论依据。 ;可控性结肠炎及结肠炎相关性结直肠癌小鼠模型的构建】 通过单次小刺量地腹腔注射诱变剂氧化偶氮甲烷,周后予以循 环饮用致炎剂葡聚糖硫酸钠,我们成功构建非可控性结肠炎及其相关博士学位论文 中文摘要 性癌小鼠模型。该模型具有与人类溃疡性结肠炎及其相关性癌相似的 特征:临床表现上均有腹泻、大便隐血、粘液脓血便、体重不增 或下降。病理学观察,给予葡聚糖硫酸钠后小鼠结直肠出现明显 的炎症反应,大量炎性细胞浸润,糜烂与浅溃疡从大肠远端向近端发 展:随着葡聚糖硫酸钠的循环饮用,形成非可控性的慢性肠道炎症, 疾病进展呈现典型的“炎症一不典型增生.腺癌”的序列演进过程;不 典型增生以扁平型为主,不典型增生与癌呈多灶性,且发生于炎症较 重的部位。小鼠模型与人类溃疡性结肠炎及结肠炎相关性癌有相 似的表达谱特征。以上发现证实该模型可较好地模拟人类溃疡性结肠 炎与炎症相关性癌,有科学应用价值,可为后续试验提供保障。 【非可控性结肠炎癌变过程的转录组动态变化规律】 转录水平的变化是基因组遗传信息的集中体现,为了全而地揭示 溃疡性结肠炎相关性结直肠癌病变各阶段转录组的动态变化规律,本 研究选取“正常一炎症一不典型增生一腺癌”各病理阶段的小鼠肠道黏膜 进行全基因组表达谱芯片分析。研究发现,各病理阶段的基因表达呈 现一定的规律性,尤以早期炎症期的分子变化最为显著,分别有 与个基因探针在炎症组织中较正常组织发生了上调与调,形 成一阵“转录风暴”。多种聚类分析显示炎症期的样本严格聚为一类, 在主成分中占有绝对地位。对基因注释本体的富集度网络分 析发现,该时期变化最显著的为炎症相关基因集,包括直接参与炎症 反应的细胞因予、趋化炎症细胞的趋化因子、诱导白细胞粘附的粘附 分子、参与组织修复的血管生成因子与基质重建因子、诱导坏死细胞 凋及促进肠上皮细胞存活与增殖的因子等等,而这些基因集在不典 型增生及癌症期表达趋于缓和,表明机体在早期处于积极地防御状 态,而至后期,机体逐渐对炎症与肿瘤细胞产生耐受,