DNA质量与浓度的琼脂糖凝胶电泳法测定原理.pptVIP

实验二.DNA浓度与纯度的测定 （一）DNA浓度的分光光度计测定 实验原理： 核酸的紫外吸收 碱基含有共轭双键，使相关化合物在240-290 nm的紫外波段有强烈的吸收峰，最大吸收值在260nm左右 OD260的应用： 1. DNA或RNA的定量: OD260= 1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml单链寡聚核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚， OD260/OD280降低 注意事项： 1.为防止读数漂移： 选用TE缓冲液为溶剂（PH一定，离子强度低） 合适的稀释浓度，保证吸光值在0.1-1.5范围内 混合要均匀，无气泡和悬浮物，视窗干净 2.紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25 ?g/mL的核酸溶液。 操作步骤： 以TE缓冲液为空白对照； 将基因组DNA溶液分别用TE缓冲液稀释50倍、80倍、100倍至4ml，分别测OD260和OD280 ； 基因组DNA浓度为： OD260 ×核酸稀释倍数×50（μg/mL）；样品各稀释级别算得的浓度平均值，即作为该样品的实际DNA浓度。 以OD260/OD280初步判断提取基因组DNA的纯度。 （二）DNA质量与浓度的琼脂糖 凝胶