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荧光显微镜下检测线粒体膜电位的变化。
(5)胞质中细胞色素C的含量测定
将各组大鼠线粒体提取后的胞质分离出来,用细胞色素CELISA试剂盒测定细胞
色素C的含量。
(6)线粒体氧化应激指标测定
盒测定相关指标。
结果:
1.吴茱萸水提物的毒性考察
(1)吴茱萸急毒实验结果
3组小鼠均全部存活,无任何死亡,给药后也无任何异常反应。
(2)吴茱萸水提物量一毒关系实验结果
吴茱萸48g/kg,24g/kg,12g/kg,6g/kg组AST活性与对照组相比增加,各组
小鼠血清中的ALT活性无明显变化。
(3)吴茱萸水提物大鼠长期毒性研究
与对照组相比,给药组的心脏指数、脾脏指数、肝脏指数、甘油三酯(TG)、总胆
组的肝、肾组织均有细胞凋亡增多现象。
2.吴茱萸水提物大鼠肝毒性机制研究结果
(1)ATP含量测定
给药组的大鼠肝脏组织匀浆液中的ATP的含量明显高于对照组。
(2)线粒体形态电镜观察
将对照组大鼠肝脏线粒体物明显变化,低剂量组可见部分线粒体空泡样变,剂量
组空泡样变面积有所增大,高剂量组可见空泡样变的面积增加到线粒体的一半以上。
(3)线粒体膜通透性检测
吴茱萸给药各组线粒体相对于对照组在不同时间点的△oD值均有不同程度的减
少。
(4)线粒体膜电位测定
吴茱萸给药组的荧光强度相对于对照组明显增加,荧光显微镜下观察,吴茱萸给
药组绿色荧光明显增加,红色荧光明显减少
(5)胞质中细胞色素C的含量测定
高剂量组的大鼠肝脏细胞胞质中的细胞色素C的含量明显高于其他各组。
(6)线粒体氧化应激指标测定
给药组的GSH含量和Mn-SOD的活性显著低于正常组,IVlDA显著高于对照组。
结论:
II
吴茱萸水提物对肝脏影响较大,长期给药可导致大鼠肝组织ATP含量降低,引起
肝细胞线粒体空泡样变,膜电位下降,膜通透性增加以及细胞色素C的释放,并导致
线粒体中过氧化脂质含量升高以及抗氧化能力下降,进而导致大鼠肝细胞凋亡增加。
关键词: 吴茱萸;肝毒性;线粒体;电镜
111
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