II型鲤疱疹病毒ORF121蛋白的多克隆抗体制备及鉴定.PDFVIP

第43 卷 第 6 期 水 产 学 报 Vol. 43, No. 6 2019 年 6 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA June, 2019 文章编号: 1000-0615(2019)06-1463-09 DOI: 10.11964/jfc.20180911458 II型鲤疱疹病毒ORF121蛋白的多克隆抗体制备及鉴定 1 1,2,3 1,2,3* 余 琳 ， 吕利群 ， 王 浩 (1. 上海海洋大学，国家水生动物病原库，上海 201306 ； 2. 上海海洋大学，农业农村部淡水种质资源重点实验室，上海 201306 ； 3. 上海海洋大学，水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306) 摘要：针对CyHV-2病毒ORF121基因(GenBank ：AFJ20543.1) 进行原核表达系统的构建， 将纯化重组蛋白作为抗原来免疫BALB/c 小鼠获得多克隆抗体，应用该抗体开展CyHV-2 病毒诊断及其感染机制研究。以CyHV-2 病毒感染细胞上清液为扩增模板，扩增 ORF 121基因构建至pGEX-4T 原核表达载体，经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG) 诱导表达 rORF121 重组蛋白，利用尿素纯化后免疫6周龄BALB/c 小鼠制备多克隆抗体。结果显 示，CyHV-2病毒ORF121基因可在原核表达系统中高效表达目的重组蛋白rORF121 ，经 SDS分析大小约为60 ku ，主要以不可溶的包涵体存在。利用尿素溶解rORF121 蛋 白免疫BALB/c 小鼠获得抗ORF121蛋白的多克隆抗体，Western Blot 实验显示，该抗体可 特异性识别CyHV-2病毒感染RyuF-2 细胞样品。研究表明，利用CyHV-2感染RyuF-2 细胞 后，本研究制备的抗ORF121蛋白的多克隆抗体能够通过间接免疫荧光实验特异性识别 CyHV-2 病毒感染的细胞样品。本研究制备的抗ORF121 蛋白的多克隆抗体，能够为 CyHV-2病毒诊断技术的构建以及深入开展CyHV-2病毒感染机制提供良好的技术基础。 关键词: Ⅱ型鲤疱疹病毒；ORF121；原核表达；多克隆抗体；间接免疫荧光检测 中图分类号: Q 511; S 941.41 文献标志码: A 疱疹病毒性造血器官坏死病(herpesviral ha- 分地区养殖的异育银鲫(Carassius auratus gibelio) ematopoietic necrosis ，HVHN)是鲫(Carassius car- 中检测到CyHV-2病毒，随后该病毒在我国鲫主 [5] [6] assius) 的一种高致病性病毒病，该病由鲤疱疹病 要养殖区域暴发流行 。陈昌福等 研究了组织 毒2型(Cyprinid herpesvirus 2 ，CyHV-2)感染引 浆疫苗的防控效果，制备了异育银鲫疱疹病毒 起。CyHV-2隶属于鱼蛙疱疹病毒科(Alloherpes -