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低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞skov3血管生成拟态的影响及其机制的探讨-妇产科学专业毕业论文.慢pdf
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺
河北医科大学
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圻
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研究生签名:倍球
万方数据
目
目 录
中文摘要 1
英文摘要 4
英文缩写 8
研究论文低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响 及其机制的探讨
前言日U舌 “O“ Q 一一9
材料与方法 9
结果 ..23
附图 一25
附表 一32
讨{仑 一34
结{仑 一36
参考文献 一36
综述肿瘤血管生成及抗肿瘤血管生成治疗现状 39 致谢 一48
个人简历 ..49
万方数据
中文摘要低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响及其
中文摘要
低剂量节拍化疗对卵巢癌细胞SKOV3血管生成拟态的影响及其
机制的探讨
摘 要
目的:血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是高侵袭性恶性 肿瘤细胞所具有的自我血供的微循环结构。本实验通过对荷人卵巢上皮性 癌SKOV3细胞裸鼠异种移植瘤模型行不同模式的顺铂(DDP)化疗获取 移植瘤原代细胞,比较接受低剂量节拍化疗(10w.dose metronomic chemotherapy,LDM)和最大可耐受剂量化疗(maximum tolerated dose chemotherapy,MTD)后SKOV3移植瘤原代细胞形成VM的能力、增殖 力及侵袭力,同时分析不同化疗模式对干细胞标记物CDl33、ALDHl蛋 白表达的影响,并比较CDl33+ALDHl+和CDl33。ALDHl。细胞形成血管生 成拟态的差异,以探讨不同模式化疗对卵巢癌SKOV3细胞形成VM的影 响及其可能机制。
方法:
l建立裸鼠移植瘤模型并分组化疗:体外培养SKOV3细胞,将1×10
个细胞接种于雌性裸鼠右侧的大腿皮下,建立裸鼠异种移植瘤模型。2周 后选取30只荷瘤裸鼠随机分成三组:LDM组给予DDPImg/kg腹腔注射, 每日1次,共1 8次;MTD组给予DDP3mg/kg腹腔注射,每3日1次, 共6次;对照组给与等量生理盐水腹腔注射,每日1次,共18次。
2制备并培养肿瘤原代细胞:化疗结束后3.7天分批处死裸鼠,剥出 肿瘤经胶原酶消化、研磨、过滤、离心、洗涤,制得单细胞悬液,常规培 养72小时后获得肿瘤原代细胞。
3三维细胞培养(three.dimensional cell culture,3DCC)观察比较细 胞形成VM的能力:将三组原代细胞的单细胞悬液调整密度至5×104个
/ml,接种到3DCC模型,利用倒置显微镜连续动态观察VM开始形成的 时间和最终形成密度,并计数血管生成拟态密度(vasculogenic mimicry density,VMD)。实验重复3次,并拍照记录。
4 MTT实验检测三组原代细胞的增殖能力。
5利用Transwell小室侵袭实验检测三组原代细胞的侵袭力。
万方数据
中文摘要6采用Westemblot法检测三组原代细胞中CDl33、ALDHl蛋白的表
中文摘要
6采用Westemblot法检测三组原代细胞中CDl33、ALDHl蛋白的表 达情况。
7流式细胞分选(Fluorescence.activated cell sorting,FACS)分选细 胞:培养MTD组原代细胞至足够数量,使用CDl33、ALDHl抗体依次 标记原代细胞,采用FACS分离获得两群细胞:荧光表达较强的细胞群为 CDl33+ALDHl+细胞,荧光表达较弱的细胞群为CDl33。ALDHl‘细胞。
8 3DCC观察比较形成VM的差异:将分选得到的CDl33+ALDHl+ 细胞以5×104个/ml的密度,CDl33。ALDHl一细胞以5×104个/ml和1x105 个/ml的密度,分别接种到3DCC模型培养并观察比较其形成VM的不同。 9统计学方法:实验数据采用SPSS 17.0统计软件进行统计,计量资 料以均数士标准差表示;多组间比较采用单因素方差分析,方差齐时多重 比较采用S-N.K法;方差不齐时采用Dunnett’S T3法。以a=0.05为检验 水准,当P0.05时,差异有统计学意义;当P0.05时,差异无统计学
意
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