试验十一细胞凝集反应2018.ppt

实验十一 细胞凝集反应 《细胞与显微技术实验》 了解细胞膜的表面结构； 掌握凝集素促使细胞凝集的原理； 学习研究细胞凝集反应的方法。 一、实验目的和要求 细胞质膜：蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构 糖蛋白和糖脂分子：蛋白质和脂类与寡糖链结合形成 细胞外被：又称糖萼，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链 研究表明，细胞间的分子识别、细胞生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被有关。 二、实验原理 凝集素（lectin）是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的有植物凝集素 （phytohemagglutinin,?PNA），通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。 二、实验原理 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。 凝集素使细胞凝集的原理是：它可以与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。? 二、实验原理 三、实验用品 材料 土豆块茎、家兔。 2. 器具: 显微镜、离心机、托盘天平、研钵、剪刀、离心管、细滴管、载片、盖片。 3. 试剂: PBS缓冲液：NaCl 7.2 g、Na2HPO4 1.48 g、KH2PO4 0.43 g，加蒸馏水，定容至1 L，调pH至7.2。 1%肝素液：0.1 g肝素溶解于10 mL 0.9%氯化钠溶液中。 0.9% NaCl液 硫酸铵 1. 2%家兔红细胞悬液的制备 以无菌方法抽取兔子耳缘静脉血液（5 mL注射器先吸取3 mL 1%肝素溶液）1 mL，用生理盐水洗5次，每次3000 r/min，离心5 min，最后按沉淀的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。 2. 凝集素制备 土豆块茎： 称取去皮土豆块茎2 g，切成薄片， 加10 mL PBS缓冲液，浸泡2 h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 3. 细胞凝集反应 土豆凝集素1滴、2%兔血红细胞液1滴，在载玻片上混匀，静置20 min；以PBS缓冲液加2%血细胞悬液作为对照，低倍镜下观察。 四、实验步骤 低倍镜下可以看到对照组红细胞分布均一，无凝集；实验组中红细胞凝集在一起。 五、结果观察 对照 阳性 六、实验报告及思考题 1. 绘图简图表示血细胞凝集过程，并说明原因。 2. 哪些因素影响细胞凝集反应? 3. 结合凝集素的特性，简述凝集素在生物学中有何应用？研究凝集素有何意义？