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第十六章 色谱分析法概论 (Introduction of chromatography) 主讲: 袁建梅 E-mail: yyjm@163.com 色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特分离植物色素时采用。他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相 （stationary phase）;自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相 (mobile phase);装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 (column)。 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 Tiselius, A.W.K. Martin, A.J.P. Synge, R.L.M. 1948年 Nobel 化学奖 1952年 Nobel 化学奖 吸附色谱与电泳 分配色谱 色谱学的重要作用 诺贝尔化学奖：1948年，瑞典Tiselins，电泳和吸附分析；1952年，英国马丁(Martin)和辛格(Synge)，分配色谱。 应用的科学领域：生命科学、材料科学、环境科学等。 药学（药物分析）：各国药典收载了许多色谱分析方法。中国药典二部，700多种纯度检查、定性鉴别或含量测定的色谱方法;中国药典一部，600多鉴别或含量测定的色谱方法。 色谱法定义、实质和目的 定义：根据各物质在两相中的分配系数（表示溶解或吸附的能力）不同而进行分离、分析的方法。 实质：分离、分析技术 目的：定性分析或定量分析 色谱法的特点 优点：“三高”、“一快”、“一广” 色谱法的特点 一、色谱过程 一、色谱过程 实现色谱操作的基本条件是必须具备相对运动的两相，固定相和流动相。 色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次“分配”的过程。 吸附色谱过程 分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出； 吸附能力强的组分后流出。 二、色谱流出曲线和有关概念 （一）色谱流出曲线和色谱峰 对称因子 1. 死时间（dead time, t0) 不被固定相吸附或溶解的物质（如空气、甲烷等）进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积。 2. 保留时间(retention time, tR)：试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间。 3. 调整保留时间(adjusted retention time, tR′) 某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间，即 tR′= tR ? t0 tR′实际上是组分在固定相中保留的总时间。 调整保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，因此有时用保留体积来表示保留值。 4.死体积(dead volume, V0) 柱管内固定相颗粒间间隙、进样器至色谱柱间导管的容积、柱出口导管及检测器内腔容积的总和。 死体积可由死时间与流动相流速Fc（cm3·min-1）计算。 V0 = t0Fc 5. 保留体积(retention volume, VR) 指从进样开始到被测组分在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。对于正常峰，该组分的1/2量被洗脱出色谱柱时所消耗的流动相体积为保留体积。保留时间与保留体积关系： VR= tRFc 6.调整保留体积(adjusted retention volume, VR?) 某组分的保留体积扣除死体积后，称为该组分的调整保留体积。色谱定性参数之一。 VR? = VR ? V0 = tR? Fc 1. 分配系数K（distribution coefficien