GB/T 31790-2015马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 ,____ 中华人民共和 国 国彖标准 GB/T 31790—2015 马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Potato spindle tuber viroid 2015-07-03 发布 2015-1 1-27 实施 幅畿勰畫曹1警彎畫发布 GB/T 31790—2015 -—1— 刖 旨 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识別这些专利的责任。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民 共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、黑龙江省农业科学院植物脱毒 苗木研究所、中华人民共和国甘肃出入境检验检疫局、 中华人民共和国山东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：张永江、刘洪义、刘忠梅、辛言言、 慧、陈红运、马洁、 吕典秋、沈建国、廖富荣、 文朝慧、张成标、吴兴海。 GB/T 31790—2015 马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了基于寄主植物症状及基因组特征的马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法。 本标准适用于可能携带有马铃薯纺锤块茎类病毒的马铃薯组织材料的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18133马铃薯种薯 SN/T 2481进境马铃薯种薯检疫操作规程 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 电子分析天平(0.001 g)、垂直电泳槽、小型离心机、台式冷冻离心机、普通PCR仪、实时荧光PCR 仪、 电泳系统、pH计、凝胶成像系统、4 °C冰箱、超净工作台、一80 °C超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、 涡旋振荡器、微波炉等。 3.2用具 可调移液器(2.5 ( «LJ0 #L、20 mLJ00 pL、 000 yL)、吸头、离心管(0.2 mL.0.5 mL.1.5 mL)及研 钵等。 3.3试剂 除有特殊说明外,所有试验用试剂均为分析纯或生化试剂。 R试剂见附录B；RT-PCR试剂见附录C；实时荧光RT-PCR试剂见附录D。 4检测方法 4.1样品制备 4.1.1脱毒苗制样:对脱毒苗要逐株制样，在无菌条件下，从脱毒苗上剪下长2 cm的茎段，放于小研钵 中，用于提取核酸并进行后续检测；把取样的脱毒苗放回试管中，封好管口并编号，以便根据检测结果决 定取舍。 4.1.2种薯制样:在隔离种植前对种薯块茎进行症状检查,对有明显症状的薯块，直接取症状部位0.2 g〜 0.5 g用于核酸提取并进行后续检测;对于无明显症状的薯块进行隔离种植。 4.1.3隔离种植植株制样：种薯隔离种植按照SN/T 2481的规定执行，生长温度应至少高于18 °C (更 1 GB/T 31790—2015 适宜的温度是高于20 °C）和至少16 h的光周期.在牛长期间进行严格的症状检杳，症状参见附录A„ 在花期或接近花期时，对