cDNA文库组标准流程五(cDNA双链和载体的连接).pdfVIP

中国试剂网 3.20.1.8 cDNA 文库组标准流程五(cDNA 双链和载体的连接) 1.连接： 根据载体和cDNA 的电泳定量结果，每个样品设置3 个比例的连接， 即：insert/vector=1/3 incert/vector=1/1 insert/vector=3/1 按以下体系依次加入： ddH2O xul T4 ligase 10x buffer 1ul PBK(E/X)vector(20ng/ul) 1ul cDNA ( 由浓度及连接比例而定) T4 DNA ligase(3U/ul) 1ul Total 10ul 14℃，连接过夜 2 ．检测：（PCR 方法） 取适量PCR 薄壁管，置于冰上，按以下体系依次加入： 连接产物 insert vector 阳性对照 阴性对照（H20 ） 模板： 1 1 1 1 1 10xbuffer 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5