GBT 18936-XXXX 高致病性禽 流 感诊断技术(征求意见稿).doc

GB/T××××____×××× PAGE 2 附件4 ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T ××××—×××× 高致病性禽流感诊断技术 Diagnostic techniques for highly pathogenic avian influenza （草案） FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 XXXX=XX-XX 实施 GB/T××××____×××× PAGE 2 PAGE 8 - PAGE PAGE 4 - GB/T ××××—×××× 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009的规则起草。 本标准替代GB/T 18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》，除编辑性修改外，主要技术变化如下： ——增述了关于高致病性禽流感RT-PCR试验、荧光RT-PCR试验、胶体金试验的技术要求； ——删除了“琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验”； ——删除了“间接酶联免疫吸附试验(ELISA)”。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准起草人：王秀荣、田国彬、邓国华、施建忠、曾显营、陈化兰。 《高致病性禽流感诊断技术》的历次版本发布情况为： ——GB/T 18936-2003  GB/T ××××—×××× 高致病性禽流感诊断技术 1 范围 本标准规定了高致病性禽流感诊断的技术要求。 本标准适用于高致病性禽流感的诊断。病毒分离与鉴定方法适用于高等级生物安全实验室对高致病性禽流感(HPAI)病毒的病原学诊断；血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验方法适用于血凝素亚型的诊断和抗体效价测定；RT-PCR和荧光RT-PCR试验适用于禽流感病毒核酸的特异性检验；胶体金试验方法适用于基层现场快速初筛。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 19442-2004 高致病性禽流感防治技术规范 NY/T 765-2004 高致病性禽流感样品采集保存及运输技术规范 3 临床诊断 3.1 临床症状 3.1.1 精神沉郁，嗜睡，头翅下垂，呆立一边；食欲不振；呼吸困难，有呼吸道症状。 3.1.2 鸡冠发绀、发紫、发凉；眼结膜发红；排黄、白、绿粪便，并有未完全消化的饲料；脚鳞或有出血。 3.1.3产蛋突然下降，软壳蛋、畸形蛋增多，有神经症状，可见歪脖子现象。 3.1.4鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状，有时可见角膜炎症，甚至失明。 3.2 病理变化 3.2.1 气管弥漫性充血、出血，有少量粘液；肺部有炎性症状，成纤维化。 3.2.2 腹腔有浑浊的炎性分泌物；肠道可见卡他性炎症；输卵管内有浑浊的炎性分泌物，卵巢变性坏死、卵泡充血、出血、萎缩、破裂,有的可见“卵黄性腹膜炎”；胰腺边缘有出血、坏死。 3.2.3心冠及腹部脂肪出血；腺胃乳头可见出血；盲肠扁桃体肿大出血；直肠粘膜及泄殖腔出血。 4 病毒分离和鉴定 4.1 病料的采集 4.1.1总则 尽量使用新鲜的样品材料。 死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品，进行分别处理或者同时处理；活禽病料应包括气管或泄殖腔拭子，尤其是以采集气管拭子更好；小珍禽用拭子取样易造成损伤，可采集新鲜粪便。 采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品前处理过程中须戴一次性手套，注意无菌操作。 4.1.2取样工具 采样专用商品化棉拭子、剪刀、镊子、研钵、5mL采样管、商品化一次性采样袋。 除采样袋外，上述取样工具必须经121℃±2 ℃，15 min高压灭菌并烘干或经160 ℃干烤2 h。 4.1.3 样品采集 4.1.3.1 拭子样品 根据动物种类可分别采集咽喉拭子、泄殖腔拭子（禽类）或鼻拭子（猪）。采集方法如下： ——取咽喉拭子时将拭子深入喉头及上颚裂来回刮2次～3次并旋转，取分泌液； ——取泄殖腔拭子时将拭子深入泄殖腔旋转一圈并沾取少量粪便； ——取鼻拭子时将拭子深入鼻腔来回刮2次～3次并旋转，取分泌物； 将采样后的拭子分别放入盛有含青霉素和链霉素的1.0 mL PBS（配置方法见附录A1）的采样管中，编号。 4.1.3.2 肌肉或脏器样品 用无菌剪、镊采集待检脏器或肌肉组织，装入无菌采样袋或其它灭菌容器，编号。 4.1.3.3 样品贮运 样品采集