柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊测定USP.ppt

柱分配色谱-紫外分光光度法——阿司匹林胶囊测定（USP） 水杨酸的限量测定 高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 注入进样阀的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。 现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9?107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 阿司匹林栓剂的含量测定 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） 流动相：甲醇-二乙胺水溶液-冰醋酸 检测波长：280nm 内标物质：咖啡因 系统适用性试验： n——按阿司匹林应不低于2000， R——阿司匹林、水杨酸与内标物峰的分离度应大于1.5 溶液配制： 内标溶液：取咖啡因，加乙醇制成4mg/ml 对照品溶液：阿司匹林0.15g，精密加内标液5ml，稀释至50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。 供试品溶液：取5粒，精密称定，在40-50?C水浴上熔融，精密量取适量（相当于阿司匹林0.15g），精密加内标液5ml，加乙醇至50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。 测定法：取对照品溶液和供试品溶液各10ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算求得供试品溶液中阿司匹林的浓度Cx 丙磺舒原料的含量测定 色谱柱：苯基键和硅胶 流动相：磷酸二氢钠的1%冰醋酸溶液 检测波长：254nm 系统适用性实验： 　　ｎ----按丙磺舒计算不低于3900 　　拖尾因子不大于2.3 　　重复进样５次，相对标准偏差不大于1.5% 测定法：精密称取丙磺舒对照品流动相溶液和供试品流动相溶液各20ul，分别进样，记录色谱图 （按课本Ｐ１３４页公式计算丙磺舒含量） 　　 固定相填充剂的选择 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用 正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等 硅胶适用PH2-8 当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落 PH大于8需选用耐碱填充剂 PH小于2需选用耐酸填充剂 返回 流动相的选择 由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于5％，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。 返回 系统适用性试验 对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起当作完整的系统进行评估。???? 系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法类型而定。???? 色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部分。 ｎ：是色谱柱的理论板数 Ｒ：是分离度 重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样3～5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0% 返回 内标法 ???? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。???? 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。 采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知