分光光度法与血糖测定.pptVIP

* * * * * * * * * * * 1.打开样品室盖； 将空白和样品溶液分别仔细倒入比色皿中（倒入之前先用少量蒸馏水，再用少量待测溶液各润洗比色皿一次），用擦镜纸擦去比色皿表面的余液，然后将比色皿插入比色室里的卡座中。 2.关闭样品室盖，拉动卡座拉杆，将挡光板置于光路中，按一下“MODE”键，使“%T”的指示灯亮，再按一下“0%T”键，使显示窗中的数字为0.0。 3. 拉动卡座拉杆，将空白液的比色皿置于光路中按一下“100%T ABS 0”键，使显示窗中的数字为100.0。这样，仪器就调整好了。 4.再按一下“MODE”键，使“ABS”指示灯亮，按一下“100%T ABS 0”键，使显示窗中的数字为 0.000。 5.拉动卡座拉杆，将样品液的比色皿置于光路中，此时，显示窗中的数字即为样品的吸光度。注意，每次测定下一个样之前都需要用空白重新调校“0％T”和 “100％T”。 6. 测定完后，先用自来水内外冲洗干净比色皿，再用洗瓶冲洗比色皿的内外表面3次，将其粗糙面朝下斜靠在培养皿中。注意保持分光光度计的比色室内始终干燥干净，严禁将溶液洒落比色室。不测量时，请将比色室的盖子打开。 * 本实验为葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD）法测定血糖。葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 * 1.将垂直吸量管尖端插入被移取的溶液内； 2. 右手的拇指及中指拿住刻度线以上的地方，左手拿洗耳球，洗耳球的尖端插入管颈口，并使其密封，慢慢地让洗耳球自然恢复原状，直至液体上升到所要吸取的刻度线以上； 迅速移去洗耳球，立即以右手食指按住管颈口，左手拿盛放被移取溶液的器皿（烧杯、容量瓶之类），将吸量管垂直提高到吸取的刻度线与视线成水平，左手拿的器皿口接在移液管尖嘴下， 3.右手食指轻轻放松或用拇指及中指轻轻转动吸量管，使液面缓慢又平稳地下降，直至液面的弯月面与刻度线相切，立即按紧食指，不让液体流下；若尖端口有半滴稳住，应在原器皿内壁靠掉； 4.再将吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，使容器微倾斜，而使吸量管直立，然后放松右手食指，使溶液自由地顺壁流下，待溶液停止流出后，一般等待15秒钟拿出。 注意： ①如移液管未标“吹” 字，残留在移液管末端的溶液，不可用外力使其流出，因移液管的容积不包括末端残留的溶液；但如果移液管上标有“吹” 字，则最后残留在管内的液滴必须吹出。 实验报告：20% 实验操作考试：30% 理论考试：50% 预习报告 实验报告 实验一 分光光度计的使用、血糖浓度测定 1. 实 验 目 的 1.1 掌握分光光度计的原理及使用 1.2 掌握刻度吸管的使用 1.3 熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度原理及使用 2. 分光光度法 (spectrophotometry) 根据物质对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的一种定性、定量分析的方法。 2. 分光光度法 (spectrophotometry) 根据 物质 对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的定性、定量分析的一种分析方法。 溶液 单色光、复合光、光的互补 单色光 复合光 光的互补 单一波长的光 由不同波长的光组合而成的光 若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。 蓝 黄 紫红 绿 紫 黄绿 绿蓝 橙 红 蓝绿 2.1.1 溶液对光的选择性吸收 蓝 黄 紫红 绿 紫 黄绿 绿蓝 橙 红 蓝绿 溶液的颜色的产生 2.1 原理 2.1.1 溶液对光的选择性吸收 吸收程度 紫 蓝 青 绿 黄 橙 红 吸光度 A ? 定性分析基础 物质对光的选择吸收 不同物质吸收光谱不同 相同物质吸收光谱相同 吸收程度 紫 蓝 青 绿 黄 橙 红 2.1.2 光的吸收定律 根据 物质 对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的定性、定量分析的一种分析方法。 溶液 透光率 （透射比）Transmittance 透光率定义： T 取值为0.0 % ~ 100.0 % 全部吸收 T = 0.0 % 全部透射 T = 100.0 % 入射光 I0 透射光 It 2.1.2 光的吸收定律 吸光度 Absorbance 吸光度定义： A 取值为0