大肠杆菌的噬菌体.pptVIP

4、加装选择标记 野生型λ-DNA上缺少合适的选择标记，因此加 装选择标记是λ-DNA克隆载体构建的重要内容。 选择标记主要有两类： 免疫功能类标记 颜色反应类标记 . (1)免疫功能失活标记 (cI筛选) 加装选择标记cI基因 cI基因编码一种阻止λ-噬菌体进入溶菌循环的阻遏物。 含有完整标记基因的λ-载体进入受体细胞后，建立溶源状态，细菌生长缓慢，形成混浊斑； 当外源DNA插入到标记基因中， 基因灭活， λ-重组分子便进入 溶菌循环，形成透明斑。 . (2)加装选择标记lacZ（蓝白斑筛选） lacZ基因编码β-半乳 糖苷酶，能催化无色的 X-gal生成蓝色化合物。 当外源基因插入到lacZ 基因中，基因灭活，不能 合成蓝色化合物； 而空载体λ-DNA则产 生蓝色透明斑。 . 5、建立?-噬菌体的体外包装系统 体外包装原理： λ噬菌体的头部和尾部的装配是分开进行的。 头部基因发生了突变的噬菌体只能形成尾部和头部蛋白所需的蛋白因子； 将这两种突变型的噬菌体的提取物混合起来，便能够在体外装配成有生物活性的噬菌体颗粒。 尾部基因发生了突变的噬菌体则只能形成头部和 尾部蛋白所需的蛋白因子。 . . （三）λ-DNA作为载体的优点 可在体外包装成噬菌体颗粒，高效转染大肠杆菌 λ-DNA载体的装载能力为25 kb，远远大于质粒 的装载量重组λ-DNA分子的筛选较为方