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组织制片技术 病理组织制片技术  定义 要实现对病变组织的显微镜形态学检查，需要将获得的病变组织制片。我们将切片制作所采用的一系列技术。 组织制作基础制作流程 封片 染色 烤片 贴片 展片 切片 包埋 浸蜡 透明 脱水 洗涤 固定 取材 一、取材 定义 按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程。 取材 要求 (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪 要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 二、固定 定义 将组织浸入某些化学试剂。使组织细胞内所含物质尽量保持在生活状态时形态结构和位置的过程。 固定 目的 防止自溶和腐败 凝固或沉淀细胞内物质 硬化组织 增加组织的折光率 固定 方法 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 常用固定液 特性 渗透力强，能迅速渗入组织内部 不会使组织过度收缩或膨胀 能硬化、固定组织，使细胞成分的形态和位置与生活状态时相似。 使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折光率。 常用的固定液 单纯固定液 10%甲醛（福尔马林）：甲醛浓度为40%，指10ml甲醛加入90ml的水配成的。 乙醇（80%~90%最好） 乙酸（醋酸、冰醋酸） 红色字体为常用固定液 混合固定液 中性甲醇液： 甲醛120ml，蒸馏水880ml，磷酸二氢钠4g，磷酸氢二钠13g配制而成，PH值达到７。此固定液是人体组织和动物组织常用之固定液，特别是作免疫组织化学染色固定时效果较好。 乙醇-醋酸-甲醇液 乙醇-甲醇液（AF液）： 95%或无水乙醇90ml，40%甲醛10ml配制而成 Bouin液 Zenker液 固定的注意事项 及时固定（夏天超过4h，冬天超过24h组织会干涸、自溶、腐败。） 固定容器宜大 固定液应足量（为被固定组织体积的10~20倍） 防止组织变形 确定恰当的固定时间（12~24h） 组织固定的常见问题 固定液使用时间较长，有效浓度降低 固定时间正常， 但固定时间效果差 固定液的量不足 标本过薄 标本扭曲变形，过脆过硬 固定液浓度过高，过程过强 固定时间长 标本之间重叠或与容器壁、底部紧贴 标本局部固定不良