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实验 六球菌的分离鉴定（一） 实验目的 1．了解病原性球菌的检查程序。 2．掌握革兰氏染色方法。 3．掌握病原性球菌的形态和分离培养法。 实验材料 病原性球菌的形态、革兰氏染色液 普通平板、血平板、玻片、接种环 酒精灯、光学显微镜、香柏油、吸水纸、擦镜纸 实验内容 一、病原性球菌的检查程序 二 革兰氏染色法 原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色； 实验内容 而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 实验内容 方法： ①初染：在已固定的细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴室温作用一分钟后，用细流水轻轻冲洗。 ②媒染：滴加媒染剂碘液数滴，室温作用一分钟，用细流水冲洗。 ③脱色：滴加95%酒精数滴，轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片，使脱掉的染料随酒精流去， 实验内容 再滴加酒精，直到流下的酒精无色或稍淡紫色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。 ④复染：滴加稀释石炭酸复红液复染约30秒钟后用细流水冲洗。 ⑤镜检：标本染色后，凉干，滴香柏油，用油镜观察，革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色。 实验报告 1 记录革兰氏染色结果 2 记录三区划线结果
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