检测细胞中1―磷酸鞘氨醇含量LC―MSMS研究方法建立.docxVIP

检测细胞中1 一磷酸鞘氨醇含量LC-MS/MS研究方法建立 ［摘要］目的建立并确证可以检测1-磷酸鞘氨醇 (S1P)快速、灵敏、特异的LC-MS/MS定量分析方法。方 法采用C17-S1P作为内参，甲醇一步法进行蛋白沉淀，随 后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。流动相为甲醇 -0.1%甲酸水(95 ： 5, v/v),流速0. 2mL/min,每个样品的 分析时间为4 min。细胞经TNF- a处理后S1P含量显著增加; 而经DMS处理后S1P含量显著下降。结果S1P的标准曲线 线性范围为0. 1?10ng/mL。相关系数r2均大于0.989。结 论 该方法可以快速，灵敏，特异性地同时检测生物样品中 S1P的含量。 ［关键词］含量测定；1-磷酸鞘氨醇；液质联用 ［中图分类号］R743. 3 ［文献标识码］A ［文章编号］ 2095-0616 (2013) 09-09-03 鞘磷脂不仅是细胞膜的主要成分，也可作为信号分子调 控多种细胞进程，包括细胞增殖，分化，存活，死亡以及一 些细胞的炎症反应［1-2］ o几种磷脂类代谢物，特别是鞘氨 醇(Sph)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)被认为是具有显著生物活 性的关键分子，控制着细胞生存和死亡。S1P可以被S1P磷 酸酶去磷酸化为Spho Sph作为负性调节因子，抑制细胞增 殖和促进凋亡。相反，S1P作为Sph的磷酸化产物，参与了 促