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食源性致病菌血清学检验技术 福建省疾病预防控制中心 马群飞 内容 一、血清学检验的概念 二、血清学检验的类型 三、国家标准使用的血清学检验技术 四、血清学检验质量控制 基本概念：血清 血液凝固析出的淡黄色透明液体。血液放入试管中，不加抗凝剂，则血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围析出血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。 血清蛋白 为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。 血清学检验的概念 利用抗原-抗体反应的显著特异性，进行细菌的鉴别和血清学定型，已有半个多世纪的历史。细菌菌体或鞭毛等抗原的特异性抗体的存在，使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。 血清学检验的概念 体外抗原抗体反应中的抗体主要来源于血清，其检测多以血清为实验材料，故体外抗原抗体反应亦称为血清学反应（serologic reaction）或血清学试验、血清学检验。 血清学检验的概念 血清学检验指根据抗原与相应的抗体在适宜的条件下，能在体外发生特异性结合的原理，在体外用已知抗体（或抗原）检测抗原（或抗体）。 血清学检验是微生物学检验的重要方法之一。也是细菌、病毒性疾病诊断和病原菌鉴定的重要手段之一。 血清学反应的一般特点 （1）抗原与抗体的结合具有高度特异性，但当两种不同抗原分子上有共同抗原决定簇存在时，则与抗体结合时可出现交叉反应。 （2）抗原与抗体结合是分子表面的结合。两者的结合相当稳定，但是可逆的，在一定条件下可发生解离，解离后的抗原、抗体性质不变。 （3）抗原、抗体的结合按一定比例，只有在比例适当时才会出现可见反应。若抗原、抗体比例不合适，就会有未结合的抗原或抗体游离于上清液中，不能形成大块免疫复合物，故不能呈现可见反应。 （4）血清学反应可分两个阶段进行，但其间无严格界限。在第一阶段，抗原和抗体特异性结合，此阶段反应很快，几秒钟或几分钟即可完成，但无可见反应；在第二阶段，反应进入可见阶段，反应进行的很慢，往往需几分钟甚至几十分钟以至数日方可完成。而且常受电介质、温度、pH等诸多外界因素的影响。 血清学检验的类型 血清学试验可分为血清学鉴定和血清学诊断两部分。血清学试验既可定性，又可定量。 用已知抗体（即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等）检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原，称为血清学鉴定； 而用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，作为某些感染性疾病的辅助诊断，称为血清学诊断。 血清学鉴定 血清学鉴定常用的血清学试验是凝集试验（直接凝集试验和间接凝集试验）、沉淀试验、荚膜肿胀试验和毒素-抗毒素中和试验等。 凝集反应 一、直接凝集反应 二、间接凝集反应 1、正向间接凝集反应 2、反向间接凝集反应 3、凝集抑制反应 4、协同凝集反应 直接凝集反应 （一）玻片凝集试验 一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。取已知抗体（诊断血清）滴加在载玻片上，直接从培养基上刮取待检菌混匀于诊断血清中，数分钟后，如出现细菌凝集成块或肉眼可见的颗粒，即为阳性。方法简便、快速、特异性强，现行国标用于沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠埃希氏菌等的鉴定，但不能进行定量测定。 （一）玻片凝集试验 如将含有沙门氏菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应，证明该菌是沙门氏菌。 （一）玻片凝集试验 自临床初分离的细菌中，有些细菌表面含有某种表面抗原(如伤寒沙门氏菌的Vi抗原和志贺氏菌属的K抗原等)，这些抗原能阻止菌体抗原(O抗原)与相应抗体发生凝集反应，从而导致错误的判定。此时应将菌悬液于100℃中隔水煮沸(Vi抗原100℃30 min、K抗原100℃1 h)，待细菌表面抗原破坏后，再进行试验。 （一）玻片凝集试验 　用于鉴定细菌的诊断血清有以下几类： 　1、多价诊断血清：即混合诊断血清，血清中含有两种以上细菌的相应抗体。一般用于细菌定属或群。 　2、单价诊断血清：仅含一种(或型)细菌的相应抗体。可用于细菌的定种(或型)。 　3、因子诊断血清：仅含一种细菌的型特异性抗体的诊断血清称为因子血清。可用于细菌分型。 玻片凝集 结果观察 沙门氏菌的生物学性状 目前根据对某一特定O抗原共同具有的标准，将沙门氏菌属分为A～Z和O51 ～O67共42个O群，58种O抗原，63种H抗原。 到1987年底为止，已有2213个血