实验一质粒DNA的小量制备.pptVIP

质粒DNA的小量制备 基础植物生物技术 提纲 一、目的 掌握一种较常用的提取质粒DNA的方法 二、原理 碱变性法提质粒DNA是基于染色体DNA和质粒DNA的变性与复性的差异从而达到分离的目的。细菌悬浮液暴露于高pH (8.0)条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；而质粒DNA在拓扑结构上是相互缠绕的超螺旋共价闭合环状结构，因而它在高pH (8.0)条件下，两条互补链不会完全分离。当以pH 4.8的KAc高盐缓冲液调节其pH到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型，而保存在上清夜中; 而细菌蛋白质﹑破裂细胞壁和变性的染色体DNA相互缠绕形成网状复合物，通过离心这些复合物能够有效地被沉淀下来而被除去。 三、材料 (一) 仪器 超净工作台；隔水式电热恒温培养箱；摇床；2102型分光光度计；Eppendorf 5417C 常温高速离心机；XW-80型旋涡混合器；电热恒温水浴锅；低温冰箱(-20℃)～-70℃)；稳压电泳仪(0～500V，0～300mA)；Chemi-Smart 2000/3000型化学发光及凝胶成像系统； 三、材料 (二) 器皿 刻度摇菌管，微量移液器，标记笔, EP管 (三)菌种 大肠杆菌DH-5α中的Hm质粒 (四)培养基