实验一--MS培养基的配制.ppt

实验一 MS培养基的配制 一、实验目的 了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。 初步掌握培养基母液配制方法。 二、实验原理 植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。 大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。 在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。 当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。 三、实验材料与器具 1、用具器材 灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。 2、药品试剂 蒸馏水、1N HCl、1N NaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。 四、实验步骤 （2）配制MS微量元素母液 （3）配制MS铁盐母液? （4）配制MS有机母液① （5）配制MS有机母液② 配制成200倍1 L有机母液： 肌醇??? 20.0 g? （7）植物激素的配制 2、培养基的配制（以1L培养基为例） 4、融化 用搪瓷量杯量取600～700mL 的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。 5、混合 将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到1000mL。 6、调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH 或HCl溶液调pH 为6.0。 分组情况 3、培养基的分装和灭菌 溶化的培养基应该趁热分装。 分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约25 mL -30 mL。 注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。 用封口膜封口并编号。 灭菌：121℃，15-20 min。 五、注意事项 配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合， 并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热20?-?30?min），调pH值至5.5，防止FeS04结晶析出。 六、作业与思考 1．植物培养基为什么要分成母液分开配制。 * * 1、母液配制 （1）配制10倍1 L MS大量元素母液 NH4NO3? 16.5 g KH2PO4 1.7 g KNO3 19 g?? CaCl2·2H2O? 4.4 g MgSO4·7H2O? 3.7 g 配制成200倍1 L母液，依次称取: KI 0.166 g Na2MoO4·2H2O 0.05 g H3BO3 1.24 g CuSO4·5H2O? 0.005 g MnSO4·4H2O? 4.46 g?? CoCl2·6H2O? 0.005 g ZnSO4·7H2O? 1.72 g 配制成200倍l L铁盐母液，依次称取: EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O） 7.46 g? FeSO4·7H2O?? 5.56 g 配制成200倍1 L有机母液，依次称取： 盐酸硫胺素（VB1）? 0.02 g 烟酸??? 0.1 g?? 盐酸吡哆醇（VB6） ?? 0.1 g （6）配制MS有机母液③ 配制成200倍1 L有机母液： 甘氨酸??? 0.4 g? 0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。 0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。 0.1mg/mL 2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。 1、计量 根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量 mL=培养基中物质浓度（mg/L）×1000mL/母液浓度（mg/L）。 母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数 2、移液 取大烧杯（1L）一只，按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于烧杯中备用。 3、称取 称取10g琼脂，30g蔗糖备用。 0 0.05 0.5 第三组 0 0.1 1.0 第四组 2.0 0.5 0.5 第二组 1.0 0.1 0.5 第一组 2,4-D（mg/l） NAA（mg/l） 6-BA（m