GB/T 9695.23-1990肉与肉制品　L(-)-羟脯氨酸含量测定.pdf

中华人民共和国国家标准 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 GB 9695.23-90 Meat and meat products-Method for determination of L (-)- hydroxyprolin content ─────────────────────────────────────── 本标准等效采用国际标准ISO 3496-1978 《肉和肉制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定》。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉与肉制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。 本标准适用于肉与肉制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。 2 引用标准 GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法 3 原理 试样在氯化亚锡的盐酸溶液中水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T 氧化,生成含有吡咯环 的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T 。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红 色化合物,在波长558nm 处进行比色测定。 4 试剂 所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。 4.1 氯化亚锡(GB 638):0.75 ％溶液。 将氯化亚锡7.5g 溶于500mL 水中,再加入500ml 浓盐酸(GB 622) 。 4.2 盐酸(GB 622):6 mol/L 溶液。 4.3 氢氧化钠(GB 629);1 mol/L、10 mol/L 溶液。 4.4 缓冲液:将50g 柠檬酸,26.3g 氢氧化钠和146.1g 结晶乙酸钠(GB 694)溶于水,稀至1L, 此溶液与200mL 水和300mL 正丙醇混合。 4.5 氯胺T(HG 3-972)溶液:将1.41g 氯胺T,溶于10mL 水中,依次加入10mL 正丙醇和80mL 缓冲溶液(用时现配) 。 4.6 显色剂:称取10g 对二甲氨基苯甲醛,用35mL 高氯酸(GB 623)溶解,缓慢加入65mL 异丙 醇。 4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。 4.7.1 标准储备液500 μg/mL:称取50.0 mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6 mol/L 盐酸,定容至100mL 容量瓶中。 4.7.2 标准工作液5 μg/mL:吸取标准储备液5.00mL 于500mL 容量瓶中,定容。 5 仪器和设备 5.1 实验室常规设备。 5.2 绞肉机;孔径不超过4mm 。 5.3 配有冷凝管的三角瓶:250mL。 5.4 恒温水浴。 5.5 试管加热器或水浴,可控温于60℃。 5.6 分光光度计。 6 试样 6.1 按GB 9695.19 取样。 6.2 试样准备 6.2.1 生肉与生肉制品:用快刀把完整的肉切成约0.5cm**3 的小丁,装入密封样品盒中,或 免费标准下载网() 无需注册 即可下载 者用耐热塑料袋真空包装,在70℃以上保温30min, 以下按6.22 步骤进行。 6.2.2 熟肉制品:取有代表性的试样200g,于绞肉机中绞两次,使其混匀,贮于容器中备用。 6.3 制备好的试样要尽快分析,若不立即分析要密封冷藏保存,防止变质和成分变化。贮 存的试样在启用时必须重新匀质。 7 分析步骤 7.1 试样前处理 称取试样5g(精确至0.001g)放入250mL 磨口三角瓶中,注意不要使样品粘在壁上。加 几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。 趁热将水解溶液过滤于200mL 容量瓶中,用6 moL/L 热盐酸10mL 反复三次冲洗三角 瓶和 滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL 烧杯中,用10mol/L、 1 mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 为8 ±0.2,过滤于250mL 容量瓶中,用30mL 水冲洗烧杯和滤 纸 上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中, 以水洗至刻度,摇匀备用。 7.2 测定 7.2.1 标准曲线的绘制 吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL 容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0 μg/mL 。取不同浓度的上述