分光光度技术201283018000613.pptVIP

6 分光光度技术 6.1 基本原理 利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术。 使用的仪器称为分光光度计。 其中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。 紫外区可分为紫外（近紫外）和真空紫外（远紫外）。由于吸收池（又称样品池、比色杯等）和光学元件以及氧气能吸收小于190nm波长的光，因此常规紫外测定集中在近紫外区，即 200nm～400nm。可见光区为400nm～800nm。 若逐渐改变照射某物质的入射光的波长，并测定物质对各种波长光的吸收程度（吸光度“A”或光密度“O.D”）或透射程度（透光度“T”），以波长λ作横坐标，“A”或“T”为纵座标，画出连续的“A~λ”或“T~λ”曲线，即为该物质的吸收光谱曲线。 吸收光谱中，λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。 2. 光吸收定律： 朗伯——比尔（Lambert－beer）光吸收定律： A＝－lgT＝εb c A——吸光度，又称光密度“O.D”。 T——透光度， T＝I / I。， I。——为照