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兰州军区兰州总医院 门诊检验指导书 文件编号：ZYJYK-MZ-002 规程编写：张 艳 主题内容 AB0血型鉴定标准操作规程 生效日期第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 5 页 AB0血型鉴定标准操作规程 1.AB0血型鉴定原理 常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有： ①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。 ②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。 2.鉴定方法 （1）生理盐水凝集法: ①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。 ②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。 红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。 玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。 ②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。 ③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。 ④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。 ⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。 ⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。 ⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。 （2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。 3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准 准血清均采自健康人，并应符合下述条件： ①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。 ②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。 ③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。 ④冷凝集素效价：在1：4以下。 ⑤无菌。 ⑥灭活补体。 4.血型鉴定操作时注意事项 ①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。 ②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。 ③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃ ④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。 ⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。 ⑥正、反定型结果一致才可发报告。 ⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。