琼脂糖凝胶电泳系统三.ppt

发光细菌的获得 小组成员： 许江山 学号：2013141241131 杨佳 学号：2013141241024 实验一 pEGFP-N3和pET-28a质粒的提取与检测 实验二 通过PCR、酶切获取目的基因；酶切连接重组质粒。 实验三 pET-28a-GFP重组质粒转入DH5α扩增，菌落PCR鉴定阳性克隆。 实验四 提取重组质粒转入BL21中诱导表达绿色荧光蛋白 实验一 EGFP-N3和pET-28a质粒的提取与检测pEGFP-N3质粒 pET- 28a质粒 载体(Vector)： 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，转化到细胞中去外源基因进入受体进行繁殖和表达，需要运载工具，携带细胞的这种工具就叫载体。 1.1 pEGFP-N3和pET-28a质粒的提取 一、实验原理 分离质粒DNA的方法一般包括三个基本步骤：培养细菌使质粒扩增 收集和裂解细菌 分离和纯化质粒DNA 一、实验原理（碱裂解法） 溶液 Ⅰ ：50mmol/L 葡萄糖， 10mmol/ EDTA-Na， 25mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 溶液 Ⅱ ：0.4mol/L NaOH ， 2% SDS