百日咳毒素S1亚基片段在大肠杆菌中的表达.docVIP

【基础研究】中国图书分类号 Q78 Q786 文献标识码 A 文章编号 1004-5503（2009）04 【基础研究】 中国图书分类号 Q78 Q786 文献标识码 A 文章编号 1004-5503（2009）04-0320-03 百日咳毒素 S1 亚基片段在大肠杆菌中的表达 时成波 1 曹玉锋 1 张秀霞 1 吴晓娟 1 李雨桐 1 徐光磊 1 尹晓东 2 【 摘要 】 目的 构建百日咳毒素（PT）S1 亚基片段原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法 根据 GenBank 中 登录的百日咳毒素 S1 亚基基因序列，人工合成密码子优化的 S1 基因，利用重叠 PCR 技术将 S1 基因上的两段 DNA 序列拼接在 一起，形成一个新的基因序列 S1′。将该序列与 7ZTS 表达载体连接，构建重组原核表达质粒 7ZTS-S1′，转化大肠杆菌 JM109（DE3）， IPTG 诱导表达。表达产物经 SDS和 Western blot 进行鉴定。结果 S1′基因经 PCR 鉴定及测序证明与预期相符；重组表达 质粒经双酶切鉴定证明构建正确；表达蛋白的相对分子质量约 17 400，表达量约占菌体总蛋白的 8%，且具有良好的反应原性。 结论 已成功构建百日咳毒素 S1 亚基片段重组原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达了重组蛋白，为 PT 单抗及其检测试剂盒的 研制奠定了基础。