马细管冻精生产技术规程企业标准.pdf

Q/DRJF 青岛德瑞骏发生物科技股份有限公司企业标准 Q/0282 DRJF001-2015 马细管冻精生产技术规程 Technical Specification for Stallion Frozen Semen Producing 2015-01-01 发布 2015-01-2 实施 青岛德瑞骏发生物科技股份有限公司 发布 Q/0282 DRJF001-2015 前 言 本规程尚无上级标准可依，故制定企业规程作为生产和销售的依据。 本规程的附录A 为规范性附录，附录B 为资料性附录。 本规程由青岛德瑞骏发生物科技股份有限公司提出。 本规程起草单位：青岛德瑞骏发生物科技股份有限公司、伊犁德瑞骏发 生物科技有限公司。 本规程主要起草人：邹敬清、邹志钢、张建军、张凤、荣美洁、李成修、 郭海鹏、邢金凤。 本规程自发布之日起有效期三年，到期复审。 Q/0282 DRJF001-2015 马细管冻精生产技术规程 1 范围 本文件规定了马细管冻精生产技术的术语和定义、实验室准备、 马冷冻精液稀释液的配制、人工采精、精液检查与处理、精液冷冻、 冻精检测、冻精储存及运输。 本标准适用于马细管冻精生产技术。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文 件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5458 液氮生物容器 3 定义和术语 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 假台马 人工采精时供公马爬跨的模拟母马。 3.2 假阴道 模拟母马阴道环境的采精工具。 3.3 精液活力 呈前进运动精子数的多少评定精液活率。 精液活力 前进运动精子数÷ 总精子数×100% Q/0282 DRJF001-2015 4 实验室的准备 4.1 玻璃器皿的准备 玻璃器皿 （如锥形瓶、集精瓶）使前用中性洗涤剂洗涤两次， 然后用 自来水冲洗 4-6 次，最后用蒸馏水冲洗 3 次，洗净后的玻璃 器皿应光亮、内壁附着的水既不聚成水滴也不成股流下。将洗净的 玻璃器皿用干净的牛皮纸或多层纱布包裹，放入高压蒸汽灭菌锅进 行高压灭菌。灭菌后的玻璃容器放入 37℃无菌恒温干燥箱备用。 4.2 假阴道的准备 假阴道使用前应用中性洗涤剂刷洗两次，并用 自来水冲洗 4-6 次，最后用蒸馏水冲洗 3 次。将洗净的假阴道放在架子上，覆盖两 层清洁纱布，晾干备用。 4.3 一次性耗材的准备 采精前 2 小时将一次性无菌耗材放入 37℃无菌恒温干燥箱备 用。 4.4 仪器设备的准备 采精前 2 小时，准备两台恒温水浴锅，水温分别设置为 37℃和 22℃；准备 3 个操作台，温度分别设置为 37℃、22℃和 4℃。 5 稀释液的配制 5.1 基础稀释液的配制 按基础稀释液的配方精确称取葡萄糖、乳糖、棉籽糖、五水柠 檬酸钠、柠檬酸钾、HEPES 于 500mL 水中，充分溶解后，煮沸消毒。 待液体冷却至室温后加入 500mL 脱脂奶，完成基础液配制。 5.2 第一稀释液的配制 Q/0282 DRJF001-2015 取适量基础稀释液，加入 2%的蛋黄搅拌均匀即可。 5.3 第二稀释液的配制 取适量第一稀释液，加入 2.5%的甘油以及