马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖与移栽(实验报告).docVIP

. PAGE . 本科学生综合性实验报告 学号 114120*** 姓名 ￥ * @ 学院 生命科学学院 专业、班级 11应用生物教育？班 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 龙 维 彪（讲师） 开课学期 2013 至 2014 学年 下 学期 填报时间 2014 年 6 月 10 日 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案 实验序号 二 实验名称 马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖与移栽 实验时间 2014.4.14——2014.6.6 实验室 睿智楼3幢325 实验内容： 2-1 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 2-2 马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖 2-3 马铃薯试管薯苗的移栽 1．实验目的： 1)、通过本次实验，使学生掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方； 2）、通过本次实验，掌握马铃薯脱毒试管苗快速繁殖的基本技术；了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗； 3）、通过本次实验，掌握马铃薯试管薯诱导的方法和技术。 2． 实验原理、实验流程或装置示意图 实验原理 1）、将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 2）、利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进行芽生长和根再生形成单苗，从而达到快速繁殖的目的。 3）、在培养马铃薯脱毒试管苗的培养容器中（试管苗培养4-6周），加入液体的马铃薯试管薯诱导培养基，置于全黑暗条件下即可诱导马铃薯试管苗结薯[1]。 实验流程 Ⅰ、马铃薯脱毒种薯的生产程序 ①脱毒苗的培育 ； a.植物材料的选取；b.材料的处理；c.茎尖剥离；d.培养；e.病毒检测；f.无病毒苗的扩繁。 ②原原种的生产 ； ③原种生产 ； ④一级种薯生产； ⑤二级种薯生产 。 Ⅱ、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程 （1）、药品及用具的准备；（2）、培养基配制（3）、调节培养基的酸碱性至pH6.2；（4）、培养基的分装；（5）培养基的灭菌。 Ⅲ、马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖 （1）准备工作；（2）无菌操作 Ⅳ、马铃薯试管薯苗的移栽 3．实验设备及材料 1）实验用具和仪器 冰箱、普通天平、果酱瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、封口膜、橡皮筋/棉线、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台等。 2）药品和试剂： MS培养基母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、马铃薯快速繁殖培养基、75%消毒酒精、95％酒精。 3)材料： 马铃薯脱毒试管苗、培养4-6周的马铃薯脱毒试管苗。 4．实验方法步骤及注意事项 实验步骤： Ⅰ、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配方设计及配制体积 培养基配方设计：（1）根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。（2）确定培养基中各种激素的浓度及相对比例。 配方： MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖[2] 配制体积：每小组配制0.5L，用果酱瓶分装成10瓶，每人2瓶。 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程 （1）药品及用具的准备；（2）培养基配制；（3）调节培养基的酸碱性至pH6.2；（4）培养基的分装；（5）培养基的灭菌。 Ⅱ、马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖 （1）准备工作 ①接种室的清洁和消毒；②超净工作台的开机和消毒；③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基等的准备；④ 实验材料的准备。 （2）无菌操作 ① 实验操作前，操作人员洗手及手和小臂消毒；② 使用的镊子、剪刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精灯上灼烧灭菌，再放在灭菌后的培养皿中冷却后使用；③培养瓶外壁的消毒；④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中，在植入材料的前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌[3]；⑤封口、标记、将培养瓶置于培养架上，在温度20-25℃，光照强度2000-3000lx[4] Ⅲ、马铃薯试管薯苗的移栽 （1）、把培养4-6周的马铃薯脱毒试管苗从果酱瓶中取出后用清水清洗干净培养基[5]，以防止移栽后培养基为细菌、真菌等提供良好的生活环境，抑制马铃薯脱毒苗的生长。 （2）、翻地移栽，浇好水后盖上遮阴网，注意浇水管理。 注意事项 （1）、在进行实验