乳与乳制品非常规理化指标检验烟酸和烟酸铵的检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验烟酸和烟酸铵的检测 YLNB 5.13 1. 依据：GB/T 5413.15—1997 2. 方法提要 样品经热水萃取、酸性沉淀蛋白质后，以反相C18 色谱柱分离，用紫外检测器定量。 3. 试剂 3．1 盐酸溶液：c(HCl)为5.0mol/L 3．2 氢氧化钠溶液：c(NaOH)为5.0mol/L 3．3 高氯酸：体积分数为60% 3．4 无水甲醇：色谱纯 3．5 异丙醇：色谱纯 3．6 辛烷磺酸钠：优级纯 3．7 标准溶液 3．7．1 烟酸及烟酰胺标准中间溶液，浓度为100μg/mL。 称取烟酸及烟酰胺标准品各10.0mg，用水溶解，然后分别定容至100mL容量瓶中。 3．7．2 烟酸及烟酰胺混合标准工作溶液，浓度为5μg/mL。 各取5.0mL上述标准中间溶液于100mL容量瓶中，用水定容（烟酸、烟酰胺浓度均为5μg/mL）。 4. 仪器 4．1 高效液相色谱仪：带紫外检测器。 4．2 色谱柱：15cm×4.6mm，或同等性能的反相C18 柱。 4．3 酸度计。 4．4 超声波振荡器。 5. 方法 5．1 样品预处理 5．1．1 称样：精确称取样品5.0g（精确至小数点后第四位），放入100mL锥形瓶中。 5．1．2 提取：在上述锥形瓶中，加入约60℃的蒸馏水25mL，摇匀后，置于超声波振器中振摇10min。 5．1．3 沉淀：待样品溶液降至室温后，用盐酸溶液（10.1）调节样品溶液的pH值至1.70，放置2min后，再用氢氧化钠溶液（10.2）调节样品溶液的pH值至4.50。 5．1．4 定容：将样品溶液转至50mL容量瓶中，用蒸馏水反复冲洗锥形瓶，洗瓶合并于50mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗中自然过滤。取此滤液约10mL，经0.45 μm微孔滤膜加压过滤，即样品溶液。 5．2 仪器工作条件 检测器灵敏度：0.002AU/mV。 检测器波长：261nm。 柱温：25℃。 流速：1.00mL/min。 流动相：体积分数为7.0%的甲醇、体积分数为2.0%的异丙醇、1g/L辛烷磺酸钠的水溶液，用高氯酸调pH=2.10。 进样量：20μl 5．3 定量分析 5．3．1 上机测定：注射一定量的样品溶液进入液相色谱仪，得到峰面积Ai；注射与样品溶液相同体积的标准工作液进入色谱仪，得到峰面积Bi。 6. 结果计算 样品中烟酸的含量（mg/100g）=X1+X2…………………………（1） 式中：X1——样品中烟酸的含量，mg/100g； X2——样品中烟酰胺的含量，mg/100g。 其中X1或X2 ： X1（X2）= …………………………（2） 式中：m——样品的质量，g； Ai——由4．3．1所得的样品溶液的峰面积； Bi——由4．3．1所得的标准工作液的峰面积； cx——标准工作液中烟酸或烟酰胺的浓度，μg/mL； V——样品溶液的体积，mL。 7 允许差 同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。